RESUMEN
It is well known that high density lipoprotein (HDL) binds bacterial lipopolysaccharide (LPS) and neutralizes its toxicity. The aim of this work was to study changes in the apolipoprotein (apo) AI structure after its interaction with LPS as well as to determine the protein domain involved in that interaction. The presented data indicate that LPS does not lead to major changes in the structure of apoAI, judging from Trp fluorescence spectra. However, analysis of denaturation behavior and binding of ANS show that LPS induces a loosened protein conformation. Further evidence for an apoAI-LPS specific interaction was obtained by incubation of the protein with (125)I-ASD-LPS. The results show that multiple regions of the protein were able to interact with LPS, according to its amphiphatic nature. Finally, the contribution of the purified C-terminal fragment of the protein in the endotoxin neutralization was evaluated in comparison with the effect of apoAI. In both cases, the same decrease in tumor necrosis factor-α released was observed. This result suggests that the C-terminal half of apoAI is the main domain responsible of the neutralization effect of this protein. Our data may provide innovative pharmacological tools in endotoxin neutralization therapies.
Asunto(s)
Apolipoproteína A-I/metabolismo , Azidas/metabolismo , Endotoxinas/metabolismo , Lipopolisacáridos/metabolismo , Macrófagos/efectos de los fármacos , Fragmentos de Péptidos/metabolismo , Animales , Apolipoproteína A-I/farmacología , Azidas/síntesis química , Línea Celular , Endotoxemia/tratamiento farmacológico , Endotoxinas/antagonistas & inhibidores , Lipopolisacáridos/síntesis química , Macrófagos/inmunología , Macrófagos/metabolismo , Macrófagos/patología , Ratones , Fragmentos de Péptidos/farmacología , Unión Proteica , Conformación Proteica , Espectrometría de Fluorescencia , Factor de Necrosis Tumoral alfa/metabolismoRESUMEN
En los últimos años el óxido nítrico (ON), una molécula sencilla pero altamente reactiva, ha sido el centro de una gran cantidad de investigaciones. Es sintetizado en los tejidos mamíferos a partir del aminoácido L-arginina por una reacción enzimática catalizada por la sintasa de óxido nítrico (SON), produciendo L-citrulina y, ON. El ON tiene una media vida muy corta, es liposoluble, reacciona fácilmente con un gran número de sistemas enzimáticos, y es producido por una amplia variedad de células. La enzima SON existe en, al menos, tres formas: dos isoformas son calcio dependientes y están continuamente presentes en células específicas, llamadas SON constitutivas (CSON). De éstas, una isoforma está presente en el citosol de las células neuronales (nSON), mientras la otra isoforma está presente en forma de proteína ligada a las membranas en las células endoteliales (eSON). Las cSON producen pequeñas cantidades de ON, después de que ocurre una estimulación por agonistas específicos. El ON producido por las cSON frecuentemente media señales celulares y comunicación celulas. Una tercera isofroma de SON es calcio-independientemente, no está presente en células no estimuladas y produce grandes cantidades de ON siguiendo a la estimulación de células apropiadas con citoquinas o lipopolisacáridos. Esta isoforma es llamada SON inducible (iSON). El ON es un mediador tanto de procesos fisiológicos como patológicos. Actúa directamente en sus blancos celulares, de los cuales el más importante es la guanilatociclasa, y produce una gran variedad de efectos biológicos, que van desde citoprotección a citotoxicidad. Es motivo de la presente revisión un análisis de la bio-química y fisiología del ON, así como de sus acciones biológicas y posibles implicaciones terapéuticas