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BACKGROUND Topical treatment of New World cutaneous leishmaniasis can be affected by bacterial coinfection, hyperkeratosis, and transdermal drug delivery. OBJECTIVE The aim of this work was to evaluate the therapeutic response and safety of the topical, sequential use of antiseptic, keratolytic, and pentamidine isethionate (PMD) creams (3-PACK kit) on CL-infected BALB/c mice. METHODS A 0.5% chlorhexidine solution (CGH), 10% salicylic acid (SA), and 3% or 6% PMD were used as antiseptic, keratolytic, and antileishmanial drugs, respectively. During the first seven days, antiseptic, followed by 10% SA gel and PMD cream, were applied topically. Subsequently, treatment was performed only with the antiseptic and PMD creams. Skin irritation, reduction of lesion size (mm2), and parasitic load were observed until 30 days of treatment were completed. FINDINGS The 3-PACK treatment using 6% PMD induced a complete lesion reduction in 3/6 mice and a partial reduction in 1/6 mice, with no parasites observed. In contrast, CGH and SA alone, along with the vehicle, were not effective (p < 0.05). Moderate to severe erythema was observed at the application site. MAIN CONCLUSION The topical 3-PACK using 6% PMD was 67% effective in the treatment of CL by Leishmania (Viannia) braziliensis. Currently, work is ongoing to improve PMD isethionate formulation and to determine a dose-response.

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Photodynamic therapy (PDT) has proven to be an effective alternative for the treatment of cutaneous leishmaniasis. Skin lesions consist of ulcers with well-defined raised edges, and granular floor. Th1 immune response is the protective profile in patients infected with Leishmania. In this study, the photodynamic therapy with 5-aminolevulinic acid, the parasitic load, and the modulation of the immune response was evaluated in mice infected with Leishmania braziliensis. Balb/c mice were infected with L. braziliensis and subsequently treated with three sections of PDT. The parasite load and mRNA expression of cytokines (IFN-γ, IL-4, IL-17, IL-22, IL-27, IL-10) and transcription factors (GATA-3, Foxp3 and T-bet) were analysed by quantitative PCR. The parasite load in the treated group was significantly lower than in the untreated group (P<.0001); in PDT treated animals, we observed an increase in IFN-γ and T-bet mRNA (P=.012 and P=.0071). There was a significant reduction in mRNA expression of IL-22 associated with an increased expression of IL-27 mRNA in the animals treated with light only (P=.0001). 5-ALA associated with photodynamic therapy promotes a reduction in parasite load and an increased expression of IFN-γ and T-bet mRNA.

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Os neutrófilos são essenciais para a resposta imune inata contra uma variedade de patógenos. Eles são capazes de modular a resposta imune através da produção de citocinas e quimiocinas, degranulação e a sua interação direta com outras células no local da infecção, tais como as células dendríticas. A interação entre as células do sistema imune inato é essencial para direcionar a resposta imune adaptativa, a qual é responsável pela eliminação de microrganismos e manutenção de memória imunológica. Objetivo: Este estudo avaliou a interação de neutrófilos humanos com Leishmania braziliensis, através da análise da expressão de moléculas de superfície, liberação de enzimas presentes nos grânulos e produção de espécies reativas de oxigênio (ROS). Também foi avaliada a interação entre neutrófilos humanos infectados e células dendríticas, a fim de se observar o efeito desta interação na indução da ativação das células dendríticas. Metodologia: Os neutrófilos foram purificados a partir do sangue periférico de doadores saudáveis e as células dendríticas foram geradas in vitro. Os neutrófilos foram infectados ou não com L. braziliensis e co-cultivados com as células dendríticas. Em seguida, os sobrenadantes e as células foram coletadas para avaliar a liberação de enzimas, tais como mieloperoxidase (MPO) e metaloproteinase 9 (MMP-9). O fenótipo e a função dos neutrófilos foram analisados através da expressão de Mac-1 (CD18 e CD11b), CD16, CD62-L e produção de ROS...

Neutrophils are essential in the innate immune response against a variety of pathogens. They are able to modulate immune response by cytokine and chemokine production, release of granules and their direct interaction with other cells at the infection site. Dendritic cells are recruited in response to cytokines and chemokines produced by neutrophils. The interaction between cells of the innate immune system is essential for targeting the adaptive immune response, which is responsible for eliminating microorganisms and the maintenance of immunological memory. Objective: Evaluate the interaction of human neutrophils with Leishmania braziliensis, through the analysis of surface molecule expression, release of granules enzymes and production of reactive oxygen species (ROS). We also evaluated the interaction between human infected neutrophils and dendritic cells, in order to observe the effect of this interaction on dendritic cells. Methodology: Neutrophils were purified from peripheral blood of healthy donors and dendritic cells were generated in vitro. Neutrophils were infected or not with L. braziliensis and cocultured with DC. Afterwards, supernatants and cells were harvested to evaluate the release of granules enzymes, such as myeloperoxidase (MPO) and metalloproteinase 9 (MMP-9). Neutrophils phenotype and function were analyzed by the expression of Mac-1 (CD18 and CD11b), CD16 and ROS production...

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A leishmaniose é uma doença de escala global, que afeta 12 milhões de pessoas e pode causar um espectro de doenças que vai desde a forma cutânea localizada, que tende para a cura espontânea, até a forma visceral que é fatal. Apesar da gravidade da doença, até o momento não existe uma vacina efetiva para prevenir a leishmaniose. Dentre os antígenos promissores para o desenvolvimento de uma vacina, destacam-se as proteínas ribossomais (S4, S6, L3 e L5) e a KMP-11, uma proteína de superfície presente nos membros da família tripanosomatidae. Nosso estudo consistiu em avaliar os efeitos da imunização com estes antígenos frente ao desafio com L. major e com L. braziliensis, empregando modelos experimentais de infecção. Primeiramente, avaliamos a capacidade protetora dos antígenos ribossomais frente à infecção por L. major. Dos quatro antígenos avaliados, apenas L3 ou L5 foram capazes de prevenir o desenvolvimento da lesão e de diminuir a carga parasitária. A vacinação de camundongos com estes antígenos, na presença de CpG, induziu um perfil de resposta Th1, com elevada produção de IFN-γ, baixa produção de IL-10 e presença de anticorpos IgG2a. Em seguida, avaliamos a capacidade protetora dos antígenos L3 e L5...

Leishmaniasis is a global disease affecting 12 million people and can cause diseases that range from self-healing localized cutaneous leishmaniasis to fatal visceral leishmaniasis. Despite the severity of the disease, there is no effective vaccine to prevent leishmaniasis. Among the promising antigens for the development of a vaccine, stand out the ribosomal proteins (S4, S6, L3, and L5) and KMP-11, a surface protein, widely found in the members of family Trypanosomatidae. Our study evaluated the effects of immunization with these antigens upon challenge with L. major and L. braziliensis, employing the experimental models of infection. First, we evaluated the protective ability of ribosomal antigens to infection by L. major. Among the four antigens examined only L3 or L5...

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A arginase é uma importante enzima envolvida no processo de desintoxicação, eliminando amônia via ciclo da ureia, hidrolisando a L-arginina à L-ornitina e ureia. L-ornitina pode ser metabolizada pela ornitina descarboxilase (ODC), dando origem a poliaminas, que são importantes para divisão e proliferação celular. A L. major usa esta via metabólica para proliferar dentro do macrófago durante a infecção. Por outro lado, a óxido nítrico sintase (NOS) oxida a L-arginina à citrulina e óxido nítrico, participando, desta forma, da eliminação do parasita. Estas enzimas podem ser moduladas na presença de citocinas. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre arginase e óxido nítrico durante a infecção experimental causada por L. braziliensis. No modelo cutâneo de infecção por L. braziliensis, camundongos BALB/c desenvolvem uma lesão que cura espontaneamente na décima semana após infecção. Os parasitas, no entanto, persistem no linfonodo de drenagem (LNd) até 6 meses após a infecção. Camundongos BALB/c foram infectados com L. braziliensis, na derme da orelha, e o desenvolvimento da lesão, a carga parasitária, a atividade da arginase e a produção de óxido nítrico (NO) foram avaliados, assim como a produção de citocinas. A atividade da arginase na orelha aumenta com o desenvolvimento da lesão e diminui com a cura da mesma. No LNd, a atividade da arginase foi detectada junto com a persistência do parasita. A presença de NO na orelha foi maior no pico de desenvolvimento da lesão, acompanhando a presença de IFN-g, no LNd. Com a cura da clínica, houve redução dos níveis de NO na orelha, acompanhado de aumento na produção de TGF-b no LNd. A inibição da arginase, utilizando Nor-NOHA, reduziu significativamente o tamanho da lesão e a carga parasitária na orelha e no LNd. Curiosamente, este efeito foi associado a uma maior produção de IL-4 e IL-10. Por outro lado, a suplementação com L-arginina, o substrato comum para as enzimas iNOS e arginase exacerbou o tamanho da lesão e elevou a carga parasitária. Nossos dados sugerem que a arginase está envolvida com a multiplicação de L. braziliensis, causando a lesão na orelha e, posteriormente, está envolvida com a persistência do parasita no LNd.

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Infecções causadas por Leishmania (Viannia) braziliensis apresentam manifestações clínicas diversas e a leishmaniose cutânea localizada (LCL) é a forma clínica mais comum. Na Terra Indígena Xakriabá, localizada no norte de Minas Gerais, 212 casos autóctones de LCL foram registrados no período de 2001 a 2007. O grande número de casos e as particularidades da área reforçam o interesse de investigar aspectos da resposta imune do hospedeiro em relação à infecção. O óxido nítrico (NO) é um potente agente citotóxico presente na resposta imune anti-Leishmania. Na LCL, um dos mecanismos de produção de NO envolve a ligação de IgE ao receptor CD23 de macrófagos num microambiente de citocinas IFN-γ ou IL-4. Apesar do papel crucial do NO no curso da infecção, tem sido relatada a existência de isolados de L. (V.) braziliensis resistentes à ação dessa molécula. Assim, os objetivos do presente trabalho foram avaliar por citometria de fluxo, o perfil de expressão do marcador de ativação CD23 e de produção de NO intracelular por monócitos e o perfil de expressão das citocinas IFN-γ e IL-4 por linfócitos T do sangue periférico de indivíduos não infectados (NI, n=10), Teste de Montenegro positivo sem lesão (TM+, n=13) e portadores de leishmaniose cutânea localizada (LCL, n=17), considerando o tempo de evolução da lesão (LCL<60 dias, n=7; LCL>60 dias, n=10). Foi feita também a dosagem dos níveis séricos de IgE dos indivíduos participantes. Além disso, investigou se a possível presença de L. (V.) braziliensis resistentes/susceptíveis ao NO em isolados de pacientes responsivos (C, n=5) e refratários ao tratamento (FT, n=5) com Glucantime®. Para o estudo imunológico foram realizadas culturas de leucócitos do sangue periférico na ausência (CC) ou presença de formas promastigotas vivas de L.(V.) braziliensis (LEISH) ou na presença de antígeno solúvel de L. (V.) braziliensis. A dosagem dos níveis séricos de IgE foi feita utilizando-se kit específico baseado na técnica ELISA sanduíche. Para identificação do perfil de resistência dos isolados foram feitos ensaios de viabilidade utilizando-se a técnica do MTT. Os resultados obtidos como estudo imunológico mostram que o grupo LCL apresentou maior expressão de CD23 e maior produção de NO por monócitos em relação aos grupos TM+ e NI, além de menor expressão de IFN-g e IL-4 por linfócitos T CD4+ em relação ao grupo TM+. Por outro lado, o grupo TM+ apresentou aumento relevante no percentual de alto produtores das citocinas avaliadas, NO e CD23 quando comparado ao grupo NI. Ao dividirmos o grupo LCL por tempo de lesão, observamos no grupo LCL<60 grande frequência de alto produtores de IL-4, NO e CD23, indicando um perfil misto de ativação/modulação da imunidade inata. Os níveis séricos de IgE total foram menores no grupo LCL quando comparado aos grupos NI e TM+, havendo redução do grupo TM+ em relação ao grupo NI. Além disso, dos 10 isolados testados, 8 foram resistentes à ação do NO, sendo que, os 2 sensíveis foram provenientes de indivíduos responsivos ao tratamento com Glucantime®. Diante disso, foi possível inferir que outras fontes celulares, além dos linfócitos T, podem estar envolvidas na produção de citocinas no grupo LCL e que no grupo TM+ há forte indício da participação do mecanismo de ativação de monócitos e indução de NO investigado neste estudo, favorecendo o controle da infecção, impedindo assim, o aparecimento de lesões. Além disso, a existência de isolados de L. (V.) braziliensis resistentes à ação do NO corrobora com achados de outros autores e pode estar diretamente relacionada com a resistência à ação do Glucantime®.

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A emergência de espécies de Leishmania resistentes ao antimonial é um grave problema em vários países. A quimioterapia é a medida mais importante para o controle das leishmanioses, visto que não existe ainda uma vacina eficiente para uso em humanos. Além disso, o controle vetorial é difícil em razão das características ambientais muito diversas e da existência de um grande número de reservatórios domésticos e silvestres dificulta também o controle. Os antimoniais pentavalentes, SbV, são os medicamentos de primeira escolha no tratamento de todas as formas de leishmaniose em vários países. Apesar de serem amplamente utilizados na quimioterapia das leishmanioses por mais de setenta anos, apresentam alta toxicidade no tratamento clínico. Também, alguns pacientes são resistentes ao tratamento clínico com esses compostos. Neste trabalho, realizou-se uma análise proteômica comparativa entre linhagensde L. braziliensis e L. infantum sensíveis e resistentes ao SbIII mediante a utilização da metodologia 2-DE, seguida por espectrometria de massas (LC/MS/MS). Nesta tese utiliza-se a nomenclatura L. infantum (syn. L. chagasi). A análise comparativa dos perfis proteômicos entre as linhagens de Leishmania analisadas revelou que 192 spots foram únicos e/ou mais abundantes. Dos 132 spots proteicos submetidos à análise por MS, 80 foram identificados correspondendo a 57 proteínas distintas. A análise comparativa dos dados mostrou que a maioriadas proteínas com abundância diferencial em ambas as espécies está envolvida na defesa antioxidante, na resposta geral ao estresse, no metabolismo de glicose e de aminoácidos e na organização do citoesqueleto. Cinco proteínas foram mais abundantes em ambas as linhagens de Leishmania resistentes ao SbIII: triparedoxina peroxidase, alfa-tubulina, HSP83, HSP70 e HSP60...

Os ensaios de Western blotting 1-DE e 2-DE confirmaram os dados da análise proteômica. Estes ensaios revelaram que a ciclofilina-A é menos expressa em ambas as linhagens resistentes, LbSbR eLcSbR. De outro lado, a pteridina redutase é mais expressa na linhagem resistente LbSbR e apresenta nível de expressão similar entre as linhagens sensíveis e resistentes de L. infantum. Atriparedoxina peroxidase é mais abundante em ambas as linhagens resistentes, LbSbR e LcSbR. Estes resultados sugerem que o aumento da expressão de enzimas da defesa antioxidante pode desempenhar papel significativo na resistência dos parasitos aos antimoniais. Em conjunto, osdados mostram que o mecanismo de resistência de Leishmania spp. ao antimônio é complexo e multifatorial. É importante ressaltar que entre as 57 proteínas identificadas como diferencialmente adundantes entre as linhagens de Leishmania spp. sensíveis e resistentes ao antimonial 17 foram identificadas anteriormente por outros autores e que as outras 40 foram observadas apenas em nossa análise proteômica de linhagens de Leishmania spp. resistentes ao SbIII. Acreditamos que algumas dessas proteínas estejam associadas com a resposta geral ao estresse e que outras podem estar associadas ao mecanismo de resistência ao antimônio em Leishmania spp. Neste contexto, a futura análise funcional será muito importante para determinar a possível associação destas proteínas com o fenótipo de resistência de Leishmania aos antimoniais...

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Infecções causadas por Leishmania (Viannia) braziliensis apresentam manifestações clínicas diversas e a leishmaniose cutânea localizada (LCL) é a forma clínica mais comum. Na Terra Indígena Xakriabá, localizada no norte de Minas Gerais, 212 casos autóctones de LCL foram registrados no período de 2001 a 2007. O grande número de casos e as particularidades da área reforçam o interesse de investigar aspectos da resposta imune do hospedeiro em relação à infecção. O óxido nítrico (NO) é um potente agente citotóxico presente na resposta imune anti-Leishmania. Na LCL, um dos mecanismos de produção de NO envolve a ligação de IgE ao receptor CD23 de macrófagos num microambiente de citocinas IFN-γ ou IL-4. Apesar do papel crucial do NO no curso da infecção, tem sido relatada a existência de isolados de L. (V.) braziliensis resistentes à ação dessa molécula. Assim, os objetivos do presente trabalho foram avaliar por citometria de fluxo, o perfil de expressão do marcador de ativação CD23 e de produção de NO intracelular por monócitos e o perfil de expressão das citocinas IFN-γ e IL-4 por linfócitos T do sangue periférico de indivíduos não infectados (NI, n=10), Teste de Montenegro positivo sem lesão (TM+, n=13) e portadores de leishmaniose cutânea localizada (LCL, n=17), considerando o tempo de evolução da lesão (LCL60 dias, n=10). Foi feita também a dosagem dos níveis séricos de IgE dos indivíduos participantes. Além disso, investigou se a possível presença de L. (V.) braziliensis resistentes/susceptíveis ao NO em isolados de pacientes responsivos (C, n=5) e refratários ao tratamento (FT, n=5) com Glucantime®.

Para o estudo imunológico foram realizadas culturas de leucócitos do sangue periférico na ausência (CC) ou presença de formas promastigotas vivas de L.(V.) braziliensis (LEISH) ou na presença de antígeno solúvel de L. (V.) braziliensis. A dosagem dos níveis séricos de IgE foi feita utilizando-se kit específico baseado na técnica ELISA sanduíche. Para identificação do perfil de resistência dos isolados foram feitos ensaios de viabilidade utilizando-se a técnica do MTT. Os resultados obtidos como estudo imunológico mostram que o grupo LCL apresentou maior expressão de CD23 e maior produção de NO por monócitos em relação aos grupos TM+ e NI, além de menor expressão de IFN-g e IL-4 por linfócitos T CD4+ em relação ao grupo TM+. Por outro lado, o grupo TM+ apresentou aumento relevante no percentual de alto produtores das citocinas avaliadas, NO e CD23 quando comparado ao grupo NI. Ao dividirmos o grupo LCL por tempo de lesão, observamos no grupo LCL<60 grande frequência de alto produtores de IL-4, NO e CD23, indicando um perfil misto de ativação/modulação da imunidade inata. Os níveis séricos de IgE total foram menores no grupo LCL quando comparado aos grupos NI e TM+, havendo redução do grupo TM+ em relação ao grupo NI. Além disso, dos 10 isolados testados, 8 foram resistentes à ação do NO, sendo que, os 2 sensíveis foram provenientes de indivíduos responsivos ao tratamento com Glucantime®. Diante disso, foi possível inferir que outras fontes celulares, além dos linfócitos T, podem estar envolvidas na produção de citocinas no grupo LCL e que no grupo TM+ há forte indício da participação do mecanismo de ativação de monócitos e indução de NO investigado neste estudo, favorecendo o controle da infecção, impedindo assim, o aparecimento de lesões. Além disso, a existência de isolados de L. (V.) braziliensis resistentes à ação do NO corrobora com achados de outros autores e pode estar diretamente relacionada com a resistência à ação do Glucantime®

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A emergência de espécies de Leishmania resistentes ao antimonial é um grave problema em vários países. A quimioterapia é a medida mais importante para o controle das leishmanioses, visto que não existe ainda uma vacina eficiente para uso em humanos. Além disso, o controle vetorial é difícil em razão das características ambientais muito diversas e da existência de um grande número de reservatórios domésticos e silvestres dificulta também o controle. Os antimoniais pentavalentes, SbV, são os medicamentos de primeira escolha no tratamento de todas as formas de leishmaniose em vários países. Apesar de serem amplamente utilizados na quimioterapia das leishmanioses por mais de setenta anos, apresentam alta toxicidade no tratamento clínico. Também, alguns pacientes são resistentes ao tratamento clínico com esses compostos. Neste trabalho, realizou-se uma análise proteômica comparativa entre linhagensde L. braziliensis e L. infantum sensíveis e resistentes ao SbIII mediante a utilização da metodologia 2-DE, seguida por espectrometria de massas (LC/MS/MS). Nesta tese utiliza-se a nomenclatura L. infantum (syn. L. chagasi). A análise comparativa dos perfis proteômicos entre as linhagens de Leishmania analisadas revelou que 192 spots foram únicos e/ou mais abundantes. Dos 132 spots proteicos submetidos à análise por MS, 80 foram identificados correspondendo a 57 proteínas distintas. A análise comparativa dos dados mostrou que a maioriadas proteínas com abundância diferencial em ambas as espécies está envolvida na defesa antioxidante, na resposta geral ao estresse, no metabolismo de glicose e de aminoácidos e na organização do citoesqueleto. Cinco proteínas foram mais abundantes em ambas as linhagens de Leishmania resistentes ao SbIII: triparedoxina peroxidase, alfa-tubulina, HSP83, HSP70 e HSP60.

Os ensaios de Western blotting 1-DE e 2-DE confirmaram os dados da análise proteômica. Estes ensaios revelaram que a ciclofilina-A é menos expressa em ambas as linhagens resistentes, LbSbR eLcSbR. De outro lado, a pteridina redutase é mais expressa na linhagem resistente LbSbR e apresenta nível de expressão similar entre as linhagens sensíveis e resistentes de L. infantum. Atriparedoxina peroxidase é mais abundante em ambas as linhagens resistentes, LbSbR e LcSbR. Estes resultados sugerem que o aumento da expressão de enzimas da defesa antioxidante pode desempenhar papel significativo na resistência dos parasitos aos antimoniais. Em conjunto, osdados mostram que o mecanismo de resistência de Leishmania spp. ao antimônio é complexo e multifatorial. É importante ressaltar que entre as 57 proteínas identificadas como diferencialmente adundantes entre as linhagens de Leishmania spp. sensíveis e resistentes ao antimonial 17 foram identificadas anteriormente por outros autores e que as outras 40 foram observadas apenas em nossa análise proteômica de linhagens de Leishmania spp. resistentes ao SbIII. Acreditamos que algumas dessas proteínas estejam associadas com a resposta geral ao estresse e que outras podem estar associadas ao mecanismo de resistência ao antimônio em Leishmania spp. Neste contexto, a futura análise funcional será muito importante para determinar a possível associação destas proteínas com o fenótipo de resistência de Leishmania aos antimoniais.

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Apesar da busca por tratamentos alternativos para a Leishmaniose Cutânea (LC), os antimoniais pentavalentes (SbV) ainda permanecem como os fármacos mais amplamente usados no tratamento dessa doença. Eles podem ser eficazes e relativamente bem tolerados; entretanto, reações adversas graves e falha terapêutica ocorrem frequentemente. A possibilidade de a falha terapêutica estar associada a diferenças na sensibilidade ao SbV dos parasitos foi investigada utilizando-se, principalmente, análise de sensibilidade in vitro. Os resultados, até o momento, porém, são contraditórios. Portanto, faz-se necessária a busca por novos modelos de avaliação de sensibilidade a fármacos em Leishmania e por tratamentos alternativos que sejam menos tóxicos, como por exemplo, o desenvolvimento de formulações de uso tópico. Por isso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a sensibilidade in vivo de Leishmania (Viannia) braziliensis isoladas de pacientes portadores de LC ao antimoniato de meglumina, bem como a atividade da combinação de uma baixa dose de SbV, considerando-se o modelo de hamsters dourados (Mesocricetus auratus), com aplicação tópica de uma formulação hidrofílica de paromomicina (PA).

Para a análise de sensibilidade in vivo, hamsters foram infectados com 13 diferentes isolados e tratados com 50mg SbV/Kg/dia, durante 20 dias. Em comparação à resposta observada para a cepa de referência de L. (V.) braziliensis MHOM/BR/1975/M2903, todos os isolados mostraram-se sensíveis ao antimoniato de meglumina. Para a avaliação da combinação SbV + PA, hamsters foram infectados com três dos 13 isolados utilizados na análise de sensibilidade e com a cepa M2903 e separados em grupos que receberam esquemas terapêuticos de 25mg SbV/Kg/dia, 25mg SbV/Kg/dia + PA e apenas PA, todos por 20 dias. Para esses isolados, a dose de 25mg SbV/Kg/dia, por 20 dias, por si só, foi eficaz na cicatrização dos animais, o que prejudicou a avaliação da eficácia da associação dessa dose com a aplicação tópica de PA, considerando o parâmetro tamanho de lesão. Porém, por outro lado, também evidenciou maior sensibilidade dos isolados ao antimoniato de meglumina. Considerando-se o parâmetro carga parasitária, a combinação dos fármacos foi eficiente para redução do parasitismo no sítio de lesão apenas em um dos isolados, quando comparada à ação dos fármacos isoladamente. Para a cepa M2903, a combinação SbV + PA mostrou-se eficaz na a redução do tamanho da lesão nos animais, mas não na redução da carga parasitária

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Apesar da busca por tratamentos alternativos para a Leishmaniose Cutânea (LC), os antimoniais pentavalentes (SbV) ainda permanecem como os fármacos mais amplamente usados no tratamento dessa doença. Eles podem ser eficazes e relativamente bem tolerados; entretanto, reações adversas graves e falha terapêutica ocorrem frequentemente. A possibilidade de a falha terapêutica estar associada a diferenças na sensibilidade ao SbV dos parasitos foi investigada utilizando-se, principalmente, análise de sensibilidade in vitro. Os resultados, até o momento, porém, são contraditórios. Portanto, faz-se necessária a busca por novos modelos de avaliação de sensibilidade a fármacos em Leishmania e por tratamentos alternativos que sejam menos tóxicos, como por exemplo, o desenvolvimento de formulações de uso tópico. Por isso, o objetivo deste trabalho foi avaliar a sensibilidade in vivo de Leishmania (Viannia) braziliensis isoladas de pacientes portadores de LC ao antimoniato de meglumina, bem como a atividade da combinação de uma baixa dose de SbV, considerando-se o modelo de hamsters dourados (Mesocricetus auratus), com aplicação tópica de uma formulação hidrofílica de paromomicina (PA).

Para a análise de sensibilidade in vivo, hamsters foram infectados com 13 diferentes isolados e tratados com 50mg SbV/Kg/dia, durante 20 dias. Em comparação à resposta observada para a cepa de referência de L. (V.) braziliensis MHOM/BR/1975/M2903, todos os isolados mostraram-se sensíveis ao antimoniato de meglumina. Para a avaliação da combinação SbV + PA, hamsters foram infectados com três dos 13 isolados utilizados na análise de sensibilidade e com a cepa M2903 e separados em grupos que receberam esquemas terapêuticos de 25mg SbV/Kg/dia, 25mg SbV/Kg/dia + PA e apenas PA, todos por 20 dias. Para esses isolados, a dose de 25mg SbV/Kg/dia, por 20 dias, por si só, foi eficaz na cicatrização dos animais, o que prejudicou a avaliação da eficácia da associação dessa dose com a aplicação tópica de PA, considerando o parâmetro tamanho de lesão. Porém, por outro lado, também evidenciou maior sensibilidade dos isolados ao antimoniato de meglumina. Considerando-se o parâmetro carga parasitária, a combinação dos fármacos foi eficiente para redução do parasitismo no sítio de lesão apenas em um dos isolados, quando comparada à ação dos fármacos isoladamente. Para a cepa M2903, a combinação SbV + PA mostrou-se eficaz na a redução do tamanho da lesão nos animais, mas não na redução da carga parasitária

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A comunidade indígena Xakriabá, localizada no município de São João das Missões, norte de Minas Gerais/Brasil, tem registrado casos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) desde 2001. O presente estudo teve como objetivo descrever os casos identificados desde Junho de 2008 a setembro de 2010 , bem como acompanhar a evolução a evolução clínica dos casos até 12 meses após o fim do tratamento. Os casos suspeitos foram identificados em um levantamento da população e pelos agentes de saúde indígenas. Após a assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido, os pacientes foram entrevistados e avaliados clinicamente , e as informações foram registradas em questionários estruturados e pré- codificados. O diagnóstico foi confirmado por testes intradérmicos de reação(IDR) , exames parasitológicos ( exame direto , fragmento de biópsia ou aspirado cultura e técnicas moleculares ( PCR- RFLP) . Os diagnósticos confirmados foram aqueles que testou positivo para pelo menos um dos testes. Hematológica , testes bioquímicos e eletrocardiograma (ECG) foram realizados antes , durante e no final do tratamento com antimônio pentavalente meglumina . doses de 15 mg / kg / dia durante 20 dias (leishmaniose cutânea ) e 20 mg / kg / dia durante 30 dias (leishmaniose mucosa ) foram utilizados . Entre os 94 pacientes com lesões cutâneas avaliadas, 89 foram confirmados como LTA e 60 tratados e monitorados. os casos vieram de cinco áreas existentes , com maior ocorrência nas áreas conhecidas como" Brejo Mata Fome " (47,5% casos) e " Itapicuru " ( 43,8% dos casos). a distribuição dos casos foi semelhante entre os homens (51,7% ) e mulheres ( 48,3%) . idade dos pacientes variou de 1 a 72 anos, com a mediana de 18 anos...

os casos ocorreram predominantemente entre os trabalhadores rurais que ganham menos de um salário mínimo. maioria dos pacientes apresentava lesões atípicas (70,1%) e uma única lesão (60,7%) . o tempo entre o início da lesão e o diagnóstico variou de menos de um mês até 72 meses . Não houve contra-indicações para o uso de antimônio pentavalente . Sessenta pacientes foram tratados e, após o 20 º dia, 24 (40,0%)apresentavam lesões que foram completamente epitelizadas enquanto outros apresentaram os parcialmente cicatrizadas . Esses dois grupos foram comparados por características demográficas, co - infecções , número, tamanho , aparência e localização das lesões , tempo de início dos sintomas, infecções bacterianas, uso de medicamentos caseiros ou comerciais, tamanho de endurecimento, a descontinuidade do tratamento , resultados de testes de diagnóstico e genótipos de Leishmania braziliensis . Após 20 dias de tratamento , epitelização completa esteve associada a lesões parcialmente epitelizadas no primeiro exame clínico (OR = 6,5 ,IC 95 % = 2,0-21,7 ) e infecção bacteriana (OR = 0,1, IC 95 % = 0,0-0,7 ) . Uma avaliação realizada 90 dias após o final do tratamento indicou que 44 pacientes(73,3%) apresentaram lesões completamente epitelizadas. Quando estes pacientes foram comparados aos com lesões não- cicatrizadas houve uma associação entre afalha do tratamento e LTA anterior no passado (OR = 8,2, IC 95% = 1,5-46,3 ), usode medicação caseira (OR = 7,10 , IC 95 % = 1,6-71,9 ) e tempo de início dos sintomas superior a 8 meses ( OR = 6,3 , IC95% = 1,1-36,7 ) . Seis ( 10%) recidivas foram observados casos. Entre os 60 pacientes tratados, 35 não havia completado um ano de monitoramento, no momento da análise de dados. Esperamos que comeste estudo possa ampliar o conhecimento a respeito de LTA e contribuir para a melhoria do diagnóstico e tratamento da a doença na comunidade indígena Xakriabá...

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Leishmania infections induce a specific activation of host immunological response, particularly characterized by T cell expansion. Studies indicate the importance of the balance between CD4+ and CD8+ T cells, in which the first ones would have their number reduced during the healing process. Meanwhile, CD25+ T cells have been associated with the suppression of the immune response. Since the immune response has an essential role in both healing and progression of diseases, this study aimed to identify the percentage of CD3+, CD4+, CD8+, CD16+ and CD25+ T cells in the peripheral blood of patients afflicted with American cutaneous leishmaniasis (ACL) - before and after treatment - and healthy controls. Peripheral blood was collected and transferred to cytometry tubes containing monoclonal antibodies specific for cell surface markers CD3, CD4, CD8, CD16 e CD25. The immunophenotypic and morphometric parameters of cells were determined by flow cytometry and the results demonstrated a significant increase in the number of T CD8+ cells after treatment, suggesting a cytotoxic T cell response. An increase in CD25+ T cells in patients with active ACL and after treatment was also observed, suggesting the participation of these cells in the modulation of the exacerbated effector response.(AU)

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A comunidade indígena Xakriabá, localizada no município de São João das Missões, norte de Minas Gerais/Brasil, tem registrado casos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) desde 2001. O presente estudo teve como objetivo descrever os casos identificados desde Junho de 2008 a setembro de 2010 , bem como acompanhar a evolução a evolução clínica dos casos até 12 meses após o fim do tratamento. Os casos suspeitos foram identificados em um levantamento da população e pelos agentes de saúde indígenas. Após a assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido, os pacientes foram entrevistados e avaliados clinicamente , e as informações foram registradas em questionários estruturados e pré- codificados. O diagnóstico foi confirmado por testes intradérmicos de reação(IDR) , exames parasitológicos ( exame direto , fragmento de biópsia ou aspirado cultura e técnicas moleculares ( PCR- RFLP) . Os diagnósticos confirmados foram aqueles que testou positivo para pelo menos um dos testes. Hematológica , testes bioquímicos e eletrocardiograma (ECG) foram realizados antes , durante e no final do tratamento com antimônio pentavalente meglumina . doses de 15 mg / kg / dia durante 20 dias (leishmaniose cutânea ) e 20 mg / kg / dia durante 30 dias (leishmaniose mucosa ) foram utilizados . Entre os 94 pacientes com lesões cutâneas avaliadas, 89 foram confirmados como LTA e 60 tratados e monitorados. os casos vieram de cinco áreas existentes , com maior ocorrência nas áreas conhecidas como" Brejo Mata Fome " (47,5% casos) e " Itapicuru " ( 43,8% dos casos). a distribuição dos casos foi semelhante entre os homens (51,7% ) e mulheres ( 48,3%) . idade dos pacientes variou de 1 a 72 anos, com a mediana de 18 anos.

os casos ocorreram predominantemente entre os trabalhadores rurais que ganham menos de um salário mínimo. maioria dos pacientes apresentava lesões atípicas (70,1%) e uma única lesão (60,7%) . o tempo entre o início da lesão e o diagnóstico variou de menos de um mês até 72 meses . Não houve contra-indicações para o uso de antimônio pentavalente . Sessenta pacientes foram tratados e, após o 20 º dia, 24 (40,0%)apresentavam lesões que foram completamente epitelizadas enquanto outros apresentaram os parcialmente cicatrizadas . Esses dois grupos foram comparados por características demográficas, co - infecções , número, tamanho , aparência e localização das lesões , tempo de início dos sintomas, infecções bacterianas, uso de medicamentos caseiros ou comerciais, tamanho de endurecimento, a descontinuidade do tratamento , resultados de testes de diagnóstico e genótipos de Leishmania braziliensis . Após 20 dias de tratamento , epitelização completa esteve associada a lesões parcialmente epitelizadas no primeiro exame clínico (OR = 6,5 ,IC 95 % = 2,0-21,7 ) e infecção bacteriana (OR = 0,1, IC 95 % = 0,0-0,7 ) . Uma avaliação realizada 90 dias após o final do tratamento indicou que 44 pacientes(73,3%) apresentaram lesões completamente epitelizadas. Quando estes pacientes foram comparados aos com lesões não- cicatrizadas houve uma associação entre afalha do tratamento e LTA anterior no passado (OR = 8,2, IC 95% = 1,5-46,3 ), usode medicação caseira (OR = 7,10 , IC 95 % = 1,6-71,9 ) e tempo de início dos sintomas superior a 8 meses ( OR = 6,3 , IC95% = 1,1-36,7 ) . Seis ( 10%) recidivas foram observados casos. Entre os 60 pacientes tratados, 35 não havia completado um ano de monitoramento, no momento da análise de dados. Esperamos que comeste estudo possa ampliar o conhecimento a respeito de LTA e contribuir para a melhoria do diagnóstico e tratamento da a doença na comunidade indígena Xakriabá.

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A história natural da leishmaniose tegumentar americana apresenta poucos estudos relacionados ao conhecimento dos reservatórios associados à Leishmania (Viannia) braziliensis. Com o objetivo de caracterizar a infecciosidade experimental de Necromys lasiurius, Nectomys squamipes e Rattus rattus, para incriminação de hospedeiros reservatórios de L. (V.) braziliensis, foram realizados dois experimentos, utilizando Lutzomyia longipalpis e dez animais de cada espécie, ambos colonizados em laboratório. Como grupo controle foi utilizado dois hamsters (Mesocricetus auratus) para cada grupo de dez animais. No primeiro experimento, os animais foram inoculados com 5,5x106/ml de promatigotas de fase log de L. (V.) braziliensis e o segundo com um inóculo de 2,8x105/ml, para posterior realização de xenodiagnóstico. Amostras obtidas de sangue, pele, fígado e baço dos animais e exemplares de flebotomíneos foram processadas para a visualização do parasito, através do exame direto e detecção de DNA por meio de PCR específica para o subgênero Viannia. No primeiro experimento, 570 exemplares de fêmeas foram submetidos ao xenodiagnóstico e dentre estes, 338 foram dissecados e observados formas compatíveis com promastigotas em 7,7%. Dos 26 animais, 06 apresentaram resultados positivos de infectividade no teste de PCR e 08 exemplares de flebotomíneos foram positivos. No segundo experimento, 678 fêmeas foram submetidas ao xenodiagnóstico e 467 dissecadas. No exame direto, 37,3% foram positivas. Foi verificada a positividade no teste de PCR em 15, dos 29 animais submetidos ao xenodiagnóstico. 27 exemplares de flebotomíneos foram positivos na PCR específica. Estes resultados sugerem que os roedores silvestre N. lasiurus, N. squamipes e o sinantrópico R. rattus são infectivos e prováveis hospedeiros reservatórios de L. (V.) braziliensis.

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A saliva dos flebotomíneos contém moléculas farmacológicas potentes e complexas que, quando inoculadas na pele do vertebrado, são capazes de modular os sistemas hemostático, inflamatório e imune do hospedeiro. No presente estudo, nós avaliamos os efeitos do conteúdo da glândula salivar de Lutzomyia intermedia, o vetor natural da Leishmania braziliensis, na produção de citocinas e na expressão de moléculas de superfície em monócitos estimulados com LPS, infectados ou não por L. braziliensis. Avaliamos também a carga parasitária em células infectadas e expressão de quimiocinas em monócitos pré-sensibilizados com a saliva de L. intermedia e com a saliva de L. longipalpis. Monócitos selecionados de células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de doadores saudáveis foram pré-sensibilizados com SGS de L. intermedia, estimulados com LPS e, em seguida, infectados ou não com L. braziliensis. A produção de citocinas foi avaliada por ELlSA em sobrenadante de cultura; expressão de moléculas de superfície foi determinada por citometria de fluxo e a expressão de quimiocinas foi analisada por PCR em Tempo Real em ensaios de Quantificação Relativa (QR). Monócitos humanos pré-tratados com SGS de L. intermedia mostraram uma redução significante na produção de IL-10 e um aumento significante na expressão de CD86. A infecção com L. braziliensis aumentou significativamente a produção de TNF-a, porém não alterou a expressão de CD86, nem a taxa de infecção em monócitos pré-sensibilizados com SGS. A expressão de IL-8, MIP-1a, MIP-1f3 e Rantes aumentou após estímulo de monócitos humanos com SGS de L. intermedia e L. longipalpis. Nossos dados indicam que a saliva de L. intermedia é capaz de modificar a produção de citocinas, a expressão de moléculas de superfície e a expressão de quimiocinas em monócitos humanos e estas alterações podem afetar a evolução da leishmaniose em infecções naturais.

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Laboratory animals are fundamental to study immunological aspects and the efficacy of new drugs to treat leishmaniasis. However, we do not have practical and good animal models to study leishmaniasis caused by Leishmania (Viannia) braziliensis - L(V)b. In this study, thirty-two experimental animals (Cavia porcellus) were injected in the hind foot with 3x105 promastigote forms of L(V)b. The animals were followed for eight weeks. None of the experimental animals developed lesions or presented the parasite in any of the tests performed (histopathological exam, smears, culture, inoculation in hamsters, and polymerase chain reaction)

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A persistência da infecção na leishmaniose não parece ser uma exceção, mas sim uma parte do comportamento natural das infecções humanas por Leishmania. A resposta imunológica é fundamental para o estabelecimento do processo resolutivo que levará à cura clínica, mas parece incapaz de promover a cura parasitológica. A persistência parasitária vem sendo observada através da PCR, uma técnica de grande sensibilidade, e tem detectado, na leishmaniose tegumentar americana, a presença de DNA parasitário em mais de 80% das cicatrizes, dados que confirmam os achados, por cultura, de parasitos viáveis em tecidos cicatriciais. Entretanto, os mecanismos que favorecem esta permanência ainda não estão esclarecidos, mas poderiam ser responsáveis pelo aparecimento de recorrências de lesões, tanto cutâneas quanto mucosas. Essas lesões secundárias podem originar-se tanto de um processo de reinfecção exógena quanto endógena. A primeira hipótese é difícil de ser descartada nos indivíduos que vivem em áreas endêmicas e a segunda leva em conta a possibilidade de disseminação a partir do sítio primário via linfática ou sangüínea. Em nosso estudo analisamos histopatologicamente o microambiente em cicatrizes curadas espontaneamente ou após tratamento com antimonial, na tentativa de avaliarmos os fenômenos imunopatológicos envolvidos no processo de resolução e, ao mesmo tempo, na manutenção dos parasitos nas cicatrizes. Em todas as cicatrizes havia um infiltrado inflamatório residual, de intensidades variáveis, porém tendendo a diminuir de intensidade com o tempo de cura. Nesses focos inflamatórios predominam os linfócitos, sendo a maioria CD4+. Funcionalmente, há uma produção mista de citocinas tipo 1 e tipo 2, com células expressando tanto IFN-y quanto IL-4.. A expressão de IFN-y correlacionou-se positivamente com aquela de IL-4, mas não de IL-10, enquanto iNOS, encontrada em todos os casos, foi diretamente porporcional à quantidade de IFN-y e TNF-a. Não há diferença significativa na expressão funcional de citocinas ou de fenótipos com o tempo ou tipo de cura. Entretanto, as cicatrizes recentes tendem a ser mais freqüentemente positiva quanto à presença de DNA parasitário, sugerindo que o tempo de cicatrização possa ter importância na cura parasitológica. A IL-10 foi particularmente mais frequente nos casos que mostravam lesões secundárias, sugerindo que esta citocina possa ter um papel importante no estabelecimento de lesões devidas a reinfecção endógena.

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