RESUMEN
BACKGROUND: Newcastle disease is one of the most important infectious diseases of poultry, caused by Newcastle disease virus (NDV). This virus is distributed worldwide and it can cause severe economic losses in the poultry industry due to recurring outbreaks in vaccinated and unvaccinated flocks. Protection against NDV in chickens has been associated with development of humoral response. Although hemagglutination inhibition (HI) assay and ELISA do not corroborate the presence of neutralizing antibodies (nAbs); they are used to measure protection and immune response against NDV. METHODS: In this study, we established a system to recover a recombinant NDV (rLS1) from a cloned cDNA, which is able to accept exogenous genes in desired positions. An enhanced green fluorescent protein (eGFP) gene was engineered in the first position of the NDV genome and we generated a recombinant NDV carrying eGFP. This NDV- eGFP reporter virus was used to develop an eGFP-based neutralization test (eGFP-NT), in which nAbs titers were expressed as the reciprocal of the highest dilution that expressed the eGFP. RESULTS: The eGFP-NT gave conclusive results in 24 h without using any additional staining procedure. A total of 57 serum samples were assayed by conventional neutralization (NT) and eGFP-NT. Additionally, HI and a commercial ELISA kit were evaluated with the same set of samples. Although HI (R 2 = 0.816) and ELISA (R 2 = 0.791) showed substantial correlation with conventional NT, eGFP-NT showed higher correlation (R 2 = 0.994), indicating that eGFP-NT is more accurate method to quantify nAbs. CONCLUSIONS: Overall, the neutralization test developed here is a simple, rapid and reliable method for quantitation of NDV specific nAbs. It is suitable for vaccine studies and diagnostics.
Asunto(s)
Pollos , Pruebas de Neutralización/métodos , Pruebas de Neutralización/normas , Enfermedad de Newcastle/diagnóstico , Virus de la Enfermedad de Newcastle/genética , Virus de la Enfermedad de Newcastle/inmunología , Animales , Anticuerpos Neutralizantes/sangre , Anticuerpos Antivirales/sangre , Línea Celular , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática , Proteínas Fluorescentes Verdes/genética , Proteínas Fluorescentes Verdes/metabolismo , Pruebas de Inhibición de Hemaglutinación , Enfermedad de Newcastle/sangre , Enfermedad de Newcastle/inmunología , Reproducibilidad de los Resultados , Vacunas Sintéticas/genética , Vacunas Sintéticas/inmunología , Vacunas Virales/inmunologíaRESUMEN
A competitive liquid-phase-blocking concanavalin A enzyme-linked immunosorbent assay (LPB-ConA-ELISA) was developed in the current study. The assay used ConA as a capture reagent, and the sera of specific pathogen-free chickens immunized with nonpurified Newcastle disease virus (NDV) suspension as detector antibodies, to detect and quantify specific antiviral antibodies in serum samples from free-ranging pigeons. The comparison between the LPB-ConA-ELISA and the hemagglutination inhibition (HI) test for the detection of antibodies in serum samples from 107 pigeons showed significant correlation between the assays (r = 0.875), a high sensitivity (100%), specificity (95.8%), accuracy (96.3%) for the ELISA, and good agreement (κ = 0.83) between the 2 assays. The results of this study suggest that the LPB-ConA-ELISA could be a useful alternative to HI test in the serodiagnosis of NDV in pigeons, or other species of birds.
Asunto(s)
Anticuerpos Antivirales/sangre , Columbidae/virología , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática/veterinaria , Enfermedad de Newcastle/sangre , Virus de la Enfermedad de Newcastle/aislamiento & purificación , Animales , Pollos , Columbidae/sangre , Concanavalina A , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática/métodos , Pruebas de Inhibición de Hemaglutinación/veterinaria , Modelos Lineales , Enfermedad de Newcastle/virología , Curva ROC , Reproducibilidad de los Resultados , Sensibilidad y Especificidad , Organismos Libres de Patógenos EspecíficosRESUMEN
Se estudiaron 507 sueros desglosados así: 227 en obreros avícolas y 230 de un grupo control, con la técnica de inhibición de la hemaglutinación con un antígeno de Newcastle de procedencia nacional. El 36,3 de la población estudiada tenía anticuerpos, sin existir diferencias entre los grupos analizados, aunque en el grupo control se detectó un mayor porcentaje de reactores. Se recomienda efectuar otros estudios serológicos sobre la enfermedad de Newcastle, donde se emplea además de la inhibición de la hemaglutinación, la fijación de complemento u otra técnica serológica
Asunto(s)
Humanos , Enfermedad de Newcastle/sangre , Pruebas de Inhibición de Hemaglutinación , VirusRESUMEN
Se estudiaron 507 sueros desglosados así: 227 en obreros avícolas y 230 de un grupo control, con la técnica de inhibición de la hemaglutinación con un antígeno de Newcastle de procedencia nacional. El 36,3 de la población estudiada tenía anticuerpos, sin existir diferencias entre los grupos analizados, aunque en el grupo control se detectó un mayor porcentaje de reactores. Se recomienda efectuar otros estudios serológicos sobre la enfermedad de Newcastle, donde se emplea además de la inhibición de la hemaglutinación, la fijación de complemento u otra técnica serológica