RESUMEN

The aim of this study was to examine the effect of replacing the use of follicle-stimulating hormone (FSH) with equine chorionic gonadotropin (eCG) and human chorionic gonadotropin (hCG) on the in vitro maturation (IVM) of sheep oocytes. After sheep ovaries were collected (n=300), the cumulus-oocyte complexes were aspirated, selected, and divided into four groups according to the IVM medium: CON group, in which the basic IVM medium was used; and eCG, hCG, and FSH groups, in which the oocytes were immersed in basic IVM medium with 10 IU/mL eCG, 10 IU/mL hCG, and 10 µg/mL FSH-p, respectively. In vitro maturation of the oocytes was performed at 38.5 °C, in a humidified atmosphere of 5% CO2 in air, for 24 h. Subsequently, the oocytes were evaluated for the degree of cumulus-cell expansion, chromatin configuration, GSH levels, and active mitochondria. There were no significant differences for the rate of cumulus cell expansion. The percentage of oocytes in MII was higher in the eCG group than in the CON and hCG groups (P<0.05) and similar to that of the FSH group. In conclusion, eCG can be used as a substitute for FSH in IVM of sheep oocytes.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da gonadotrofina coriônica equina (eCG) e da gonadotrofina coriônica humana (hCG), em substituição ao uso de hormônio folículo estimulante (FSH) na maturação in vitro (MIV) de oócitos ovinos. Após a coleta de ovários (n=300) ovinos, os complexos cúmulus-oócitos (CCOs) foram aspirados, selecionados e divididos em quatro grupos de acordo com o meio de MIV: grupo CON, em que foi utilizado o meio MIV base; e grupos ECG, HCG e FSH, em que os oócitos foram imersos em meio MIV base adicionado de 10 UI/mL de eCG, 10 UI/mL de hCG e 10 µg/mL de FSH-p, respectivamente. A MIV dos oócitos foi realizada a 38,5°C, em atmosfera umidificada de 5% de CO2 em ar, durante 24 horas. Posteriormente, os oócitos foram avaliados, quanto grau de expansão das células do cumulus, configuração da cromatina, níveis de GSH e mitocôndrias ativas. Não foram observadas diferenças significativas com relação à taxa de expansão de células do cumulus. A percentagem de oócitos em MII foi maior no grupo ECG do que no grupo CON e HCG (P<0,05) e semelhante ao grupo FSH. Em conclusão, a eCG pode ser utilizada em substituição ao FSH na MIV de oócitos ovinos.

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The vitrification of preantral follicles followed by in vitro growth (IVG) could be valuable to produce fertilizable oocytes. However, the meiotic resumption rates of oocytes cultured from vitrified secondary follicles (SF) have been reported as suboptimal. This study aimed to verify two base media (alpha modification of minimum essential medium, α-MEM, and tissue culture medium 199, TCM199) on vitrified SF regarding different requirements during IVG. Sheep ovarian fragments were divided in six groups: (1) Fresh groups (Control α-MEM and TCM199): SF without vitrification; (2) Follicle-Vitrified (Follicle-Vit α-MEM and TCM199): SF vitrified after isolation; and (3) Tissue-Vitrified (Tissue-Vit α-MEM and TCM199): SF vitrified enclosed in ovarian fragments and, subsequently, isolated. The isolated SF were submitted to IVG for 18 days. Thereafter, the recovered cumulus-oocyte complexes (COCs) underwent in vitro maturation (IVM) and evaluation of chromatin configuration. Follicular granulosa cells were analyzed for their gene expression of Bax, Bcl2, and Connexins (CX) 37 and 43. COCs from in vivo antral follicles were used as in vivo control. Data were analyzed by analysis of variance, Tukey, and chi-square tests. Differences were considered significant if p-value is <0.05. Follicle-Vit groups had higher (p < 0.05) percentage of antrum formation compared with Tissue-Vit groups. Vitrification did not affect (p > 0.05) oocyte diameter postmaturation. Oocytes from Follicle-Vit in α-MEM reached metaphase II stage after IVM. Gene expression for CX37, CX43, and Bax was lower in Tissue-Vit groups. For Bcl2, the gene expression was the opposite. In conclusion, during IVG for 18 days, maximal oocyte meiotic resumption was not negatively impacted by vitrification and was greatest for isolated SF using α-MEM as a medium.

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Para o sucesso da maturação in vitro (MIV), faz-se necessário uma sincronização entre as maturação nuclear e citoplasmática. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo comparar o efeito do fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) como fator de crescimento na maturação in vitro (MIV) de oócitos caprinos com os fatores de crescimento epidermal (EGF) e semelhante à insulina I (IGF-I) adicionados juntos. Complexos cúmulos oócito (CCOs) foram isolados por slicing de ovários caprinos (n=40) utilizando bisturi cirúrgico. Apenas oócitos ≥110 μm com citoplasma homogêneo circundado por pelo menos uma camada compacta e coesiva de células do cúmulus foram selecionados para MIV. O meio de cultivo de base foi o TCM199 suplementado com 1% de BSA, 5 g/mL de hormônio luteinizante (LH), 0,5 g/mL de hormônio folículo estimulante recombinante (rFSH®), 0,911 mMol/L de piruvato,1μg/mL de estradiol, e 100 μM de cisteamina, o qual foi denominado TCM199+. OsCCOs selecionados foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes tratamentos: 1) EGF e IGF-I, TCM199+ Suplementado com 10 ng/mL de EGF e 50 ng/mL de IGF-I; 2) VEGF, TCM199+ suplementado com 100 ng/mL de VEGF. Após a MIV, foram utilizados marcadores fluorescentes para avaliar a configuração da cromatina (Hoechst) e a viabilidade oocitária (calceína-AM e etídio homodímero). De uma maneira geral, ambos os tratamentos VEGF (80.2 e 35.7%) e EGF e IGF-I (70.5 e 29.9%) apresentaram resultados similares de quebra da vesícula germinativa (GVBD) e metáfase II rates (MII), respectivamente, sendo o tratamento VEGF numericamente superior ao EGF e IGF-I. Desta forma, conclui-se que o VEGF atua de forma similar ao EGF e IGF-I na competência oocitária para retomar ameiose.

For successful IVM, oocytes must undergo synchronically nuclear and cytoplasmic maturation. Thus, the aim of the present study was to compare vascular endothelial growth factor (VEGF) as a growth factor to the in vitro maturarion (IVM) to caprine oocytes instead of epidermal growth factor (EGF) plus insulin like growth factor I (IGF-I).Then, cumulus oocyte complexes (COCs) were pooled from slicing of caprine ovaries (n=40) using a surgical blade. Only oocytes ≥110 μm with homogeneous cytoplasm and surrounded by at least one compact layer of shiny and cohesive cumulus cells were selected to the IVM. The basic culture medium consisted of TCM199 supplemented with 1% of BSA, 5 g/mL of luteinizing hormone (LH), 0.5 g/mL of recombinant follicle-stimulanting hormone (rFSH®), 0.911 mMol/L pyruvate,1 μg/mL estradiol, and 100 μM cysteamine named TCM199+. The selected COCs were randomly distributed in the following treatments: 1) EGF plus IGF-I, TCM199+supplemented with 10 ng/ml of EGF and 50 ng/mL of IGF-I; 2) VEGF, TCM199+supplemented only with 100ng/mL of recombinant VEGF-A. After the IVM, oocytes were stained with fluorescent markers for the assessment of chromatin configuration (Hoechst) and to evaluate oocyte viability (calcein-AM and ethidium homodimer). Overall, both VEGF (80.2 and 35.7%) and EGF plus IGF-I (70.5 and 29.9%) treatments presented similar results of germinal vesicle breakdown (GVBD) and metaphase II rates (MII), respectively, being VEGF numerically greater than EGF plus IGF-I. Thus, we can infer that VEGF may act similar to EGF plus IGF-I in in vitro oocyte competence to resumes meiosis.

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Para o sucesso da maturação in vitro (MIV), faz-se necessário uma sincronização entre as maturação nuclear e citoplasmática. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo comparar o efeito do fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) como fator de crescimento na maturação in vitro (MIV) de oócitos caprinos com os fatores de crescimento epidermal (EGF) e semelhante à insulina I (IGF-I) adicionados juntos. Complexos cúmulos oócito (CCOs) foram isolados por slicing de ovários caprinos (n=40) utilizando bisturi cirúrgico. Apenas oócitos ≥110 μm com citoplasma homogêneo circundado por pelo menos uma camada compacta e coesiva de células do cúmulus foram selecionados para MIV. O meio de cultivo de base foi o TCM199 suplementado com 1% de BSA, 5 g/mL de hormônio luteinizante (LH), 0,5 g/mL de hormônio folículo estimulante recombinante (rFSH®), 0,911 mMol/L de piruvato,1μg/mL de estradiol, e 100 μM de cisteamina, o qual foi denominado TCM199+. OsCCOs selecionados foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes tratamentos: 1) EGF e IGF-I, TCM199+ Suplementado com 10 ng/mL de EGF e 50 ng/mL de IGF-I; 2) VEGF, TCM199+ suplementado com 100 ng/mL de VEGF. Após a MIV, foram utilizados marcadores fluorescentes para avaliar a configuração da cromatina (Hoechst) e a viabilidade oocitária (calceína-AM e etídio homodímero). De uma maneira geral, ambos os tratamentos VEGF (80.2 e 35.7%) e EGF e IGF-I (70.5 e 29.9%) apresentaram resultados similares de quebra da vesícula germinativa (GVBD) e metáfase II rates (MII), respectivamente, sendo o tratamento VEGF numericamente superior ao EGF e IGF-I. Desta forma, conclui-se que o VEGF atua de forma similar ao EGF e IGF-I na competência oocitária para retomar ameiose.(AU)

For successful IVM, oocytes must undergo synchronically nuclear and cytoplasmic maturation. Thus, the aim of the present study was to compare vascular endothelial growth factor (VEGF) as a growth factor to the in vitro maturarion (IVM) to caprine oocytes instead of epidermal growth factor (EGF) plus insulin like growth factor I (IGF-I).Then, cumulus oocyte complexes (COCs) were pooled from slicing of caprine ovaries (n=40) using a surgical blade. Only oocytes ≥110 μm with homogeneous cytoplasm and surrounded by at least one compact layer of shiny and cohesive cumulus cells were selected to the IVM. The basic culture medium consisted of TCM199 supplemented with 1% of BSA, 5 g/mL of luteinizing hormone (LH), 0.5 g/mL of recombinant follicle-stimulanting hormone (rFSH®), 0.911 mMol/L pyruvate,1 μg/mL estradiol, and 100 μM cysteamine named TCM199+. The selected COCs were randomly distributed in the following treatments: 1) EGF plus IGF-I, TCM199+supplemented with 10 ng/ml of EGF and 50 ng/mL of IGF-I; 2) VEGF, TCM199+supplemented only with 100ng/mL of recombinant VEGF-A. After the IVM, oocytes were stained with fluorescent markers for the assessment of chromatin configuration (Hoechst) and to evaluate oocyte viability (calcein-AM and ethidium homodimer). Overall, both VEGF (80.2 and 35.7%) and EGF plus IGF-I (70.5 and 29.9%) treatments presented similar results of germinal vesicle breakdown (GVBD) and metaphase II rates (MII), respectively, being VEGF numerically greater than EGF plus IGF-I. Thus, we can infer that VEGF may act similar to EGF plus IGF-I in in vitro oocyte competence to resumes meiosis.(AU)

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OBJECTIVE: This paper aims to assess a qualitative aspect of ovarian response in terms of metaphase II oocytes according to different serum Anti-Müllerian hormone levels in antagonist ICSI cycles. A prediction index might contribute to the individualization of care. METHODS: This observational study looked into 287 antagonist ICSI cycles carried out with patients treated in a single center between January of 2012 and January of 2016. Serum AMH and subgroup analyses were performed based on five AMH ranges (≤ 0.3 ng/mL;> 0.3 and ≤ 0.7 ng/mL; > 0.7 and ≤ 1.0 ng/mL; > 1.0 and < 3.0 ng/mL; ≥ 3.0 ng/mL). The variables analyzed included patient age; serum FSH and antral follicle count at the start of the cycle; number of stimulation days and number follicles ≥ 15 mm on hCG day; number of oocytes retrieved and number of metaphase II oocytes. RESULTS: AMH is a better predictor of ovarian response to controlled ovarian stimulation than AFC or serum FSH, while age is an independent marker. AMH levels ≤0.70 (patients with poor prognosis) were observed in 140 patients (48.7%). Patients within this AMH level range accounted for 92% of the 24 failed cycles (cancelled cycles, no oocytes or immature oocytes retrieved). CONCLUSION: AMH predicts the quality of ovarian response to stimulation, regardless of patient age. Women with AMH levels ≥1.0 and ≤3.0 ng/mL are probably normal responders with good prognosis. Clinical application relies on the examination of the data from each individual center and on the establishment of correlations between AMH levels and ovarian response in the form of metaphase II oocytes.

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Objetivo: comparar la calidad embrionaria y describir las tasas de implantación, embarazo y aborto en las técnicas de fertilización in vitro (FIV) y el cultivo intravaginal de ovocitos. Materiales y métodos: cohortes históricas de pacientes con tratamiento de fertilización in vitro y el cultivo intravaginal de ovocitos en el Centro Colombiano de Fertilidad y Esterilidad (Cecolfes) durante el año 2010. Se incluyeron 137 pacientes aspiradas dentro de los cuatro grupos de estudio: Grupo 1, FIV/Incubadora; Grupo 2, FIV/INVO; Grupo 3, ICSI/INVO, y Grupo 4, ICSI/Incubadora. Se midió el peso de la paciente, el número de ovocitos recuperados y óvulos maduros (MII), la tasa de implantación y la tasa de embarazo y aborto en cada uno de los grupos. Se realizó análisis mediante la prueba de Kruskal-Wallis; la calidad embrionaria fue evaluada con un análisis de covarianza multivariado (MANOVA). Resultados: se observó diferencia significativa en la calidad embrionaria entre las dos técnicas FIV e INVO (p = 0,0388). En la técnica INVO se presentaron mayores tasas de división embrionaria (μ = 7,35/INVO frente a 6,64/Incubadora) y menor fragmentación (μ = 4,67/INVO frente a 4,59/ Incubadora). En cuanto a la tasa de implantación, embarazo y aborto se obtuvieron más altos porcentajes en los grupos INVO. Conclusión: la técnica INVO se asoció a mejor calidad embrionaria. Las tasas de implantación, embarazo y bajas tasas de aborto son semejantes a las descritas en la técnica FIV.

Objective: Comparing embryo quality and describing implantation, pregnancy and abortion rates regarding in vitro fertilization (IVF) and intravaginal oocyte culture (INVO) techniques. Materials and methods: The study involved historical cohorts of patients undergoing IVF and INVO treatment in the Colombian Fertility and Sterility Centre (Centro Colombiano de Fertilidad y Esterilidad – Cecolfes) during 2010. It involved 137 aspirated patients, covering four study groups: Group 1 IVF/incubator, Group 2 IVF/INVO, Group 3 ICSI/INVO and Group 4 ICSI/incubator. The patients’ weight, the number of ovocytes retrieved, mature ovules (M2), implantation rate, pregnancy and abortion rates were measured in each group. The Kruskal-Wallis test was used for statistical analysis; embryo quality was evaluated by multivariate covariance analysis (MANOVA). Results: A significant difference was observed regarding embryo quality between IVF and INVO (p = 0.0388), the INVO technique having higher embryo cleavage rates (μ = 7.35/INVO cf 6.64/ incubator) and lower embryo fragmentation (μ = 4.67/INVO cf 4.59/incubator). INVO groups also had higher percentages concerning their implantation, pregnancy and abortion rates. Conclusion: The INVO technique led to obtaining better quality embryos; implantation, pregnancy and abortion rates were similar to those described for the IVF technique.

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Avaliou-se o efeito do soro de cadela em estro na maturação in vitro de ovócitos caninos, utilizando-se 92 ovócitos de cadelas, submetidas à cirurgia eletiva de ovarioisterectomia. Os ovócitos foram selecionados e distribuídos em dois tratamentos: T1 (n = 48), ovócitos cultivados in vitro durante 96 horas utilizando meio base - TCM199 + 5µg/mL de LH + 20µg/mL de FSH - mais 10 por cento de soro inativado de vaca em estro e T2 (n = 44), ovócitos cultivados em meio base mais 10 por cento de soro inativado de cadela em estro. O percentual de ovócitos observados em metáfase I não indicou diferenças (P>0,05) entre T1 (2,1 por cento) e T2 (0,0 por cento), porém a taxa de ovócitos maduros (metáfase II) foi diferente (P<0,05), sendo 27,1 por cento em T1 e 47,7 por cento em T2. O mesmo fato ocorreu com a taxa de cromatina condensada (P<0,01), com 14,6 e 0,0 por cento, respectivamente. Nos ovócitos sem configuração cromossômica, não foram observadas diferenças (P>0,05), sendo 56,3 por cento em T1 e 52,3 por cento em T2. Estes resultados indicam que a adição de soro de cadela em estro no meio de cultivo oferece melhores condições para o desenvolvimento in vitro, quando comparado à de soro de vaca em estro.

This study aimed to evaluate the effect of estrus on in vitro canine oocyte. A total of 92 oocyte from bitches under ovary-hysterectomy surgery was used. The oocytes were selected and randomly assigned to two different treatments, being T1 (n = 48) in vitro cultured for 96h using basic medium (TCM199 + 5µg/mL of LH + 20µg/mL of FSH), plus 10 percent of cow inactive serum in estrus and T2 (n = 44) basic medium plus 10 percent of bitch inactive serum in estrus. The percentage of oocyte observed on metaphase I do not indicate a difference (P>0.05) between T1 (2.1 percent) and T2 (0.0 percent). However, the rate of mature oocyte (metaphase II) was different (P<0.05), being 27.1 percent for T1 and 47.7 percent for T2. There was difference (P<0.05) in the condensed chromatin rate for T1 (14.6 percent) and T2 (0.0 percent), respectively. There was no difference (P>0.05) between T1 (56.3 percent) and T2 (52.3 percent) in oocyte with no chromosome configuration. These results indicate that supplementation with estrus bitch serum on culture media offer better conditions to in vitro development, when compared to estrus cow serum.

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Avaliou-se o efeito do soro de cadela em estro na maturação in vitro de ovócitos caninos, utilizando-se 92 ovócitos de cadelas, submetidas à cirurgia eletiva de ovarioisterectomia. Os ovócitos foram selecionados e distribuídos em dois tratamentos: T1 (n = 48), ovócitos cultivados in vitro durante 96 horas utilizando meio base - TCM199 + 5µg/mL de LH + 20µg/mL de FSH - mais 10 por cento de soro inativado de vaca em estro e T2 (n = 44), ovócitos cultivados em meio base mais 10 por cento de soro inativado de cadela em estro. O percentual de ovócitos observados em metáfase I não indicou diferenças (P>0,05) entre T1 (2,1 por cento) e T2 (0,0 por cento), porém a taxa de ovócitos maduros (metáfase II) foi diferente (P<0,05), sendo 27,1 por cento em T1 e 47,7 por cento em T2. O mesmo fato ocorreu com a taxa de cromatina condensada (P<0,01), com 14,6 e 0,0 por cento, respectivamente. Nos ovócitos sem configuração cromossômica, não foram observadas diferenças (P>0,05), sendo 56,3 por cento em T1 e 52,3 por cento em T2. Estes resultados indicam que a adição de soro de cadela em estro no meio de cultivo oferece melhores condições para o desenvolvimento in vitro, quando comparado à de soro de vaca em estro.(AU)

This study aimed to evaluate the effect of estrus on in vitro canine oocyte. A total of 92 oocyte from bitches under ovary-hysterectomy surgery was used. The oocytes were selected and randomly assigned to two different treatments, being T1 (n = 48) in vitro cultured for 96h using basic medium (TCM199 + 5µg/mL of LH + 20µg/mL of FSH), plus 10 percent of cow inactive serum in estrus and T2 (n = 44) basic medium plus 10 percent of bitch inactive serum in estrus. The percentage of oocyte observed on metaphase I do not indicate a difference (P>0.05) between T1 (2.1 percent) and T2 (0.0 percent). However, the rate of mature oocyte (metaphase II) was different (P<0.05), being 27.1 percent for T1 and 47.7 percent for T2. There was difference (P<0.05) in the condensed chromatin rate for T1 (14.6 percent) and T2 (0.0 percent), respectively. There was no difference (P>0.05) between T1 (56.3 percent) and T2 (52.3 percent) in oocyte with no chromosome configuration. These results indicate that supplementation with estrus bitch serum on culture media offer better conditions to in vitro development, when compared to estrus cow serum.(AU)

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Durante el proceso de maduración in vitro de oocitos, las gonadotropinas FSH y LH inducen la producción de AMPc. El AMPc tiene efecto dual, donde los altos niveles de AMPc intraoocitario mantienen su bloqueo meiótico, mientras que en las células de la granulosa inducen la maduración del oocito. Los niveles de AMPc son regulados por hidrólisis mediada por fosfodiesterasas (PDE), las cuales presentan expresión específica en el folículo, el oocito expresa la PDE 3, mientras que las células de la granulosa PDE 4. Con el objetivo de evaluar el efecto del rolipram, un inhibidor específico de PDE 4, sobre el porcentaje de maduración nuclear in vitro (MNIV) de oocitos bovinos, 629 complejos cúmulo oocito (CCO) fueron cultivados a 38.5 ºC/5% CO2/24 h, en medio TCM-199 con la adición de pFSH y hrLH, o rolipram. Los grupos experimentales fueron: adición de gonadotropinas, rolipram (25, 50 ó 75 M), rolipram 50 M + gonadotropinas, o control sin estímulo. Los oocitos fueron teñidos con DAPI y evaluados bajo fluorescencia para determinar el porcentaje de maduración nuclear por la expulsión del primer cuerpo polar. El rolipram 50M estimuló la maduración nuclear de oocitos bovinos de una manera similar a la obtenida con las gonadotropinas (76.83 vs 79.46%, p>0.05), pero en mayor medida que la observada con rolipram 25 y 75 M (31.25, y 28.61%, respectivamente). Los CCOs cultivados en presencia de rolipram 50 M+Gonadotropinas maduraron en menor proporción (63.74%) comparada con gonadotropinas (p<0.01) o rolipram 50 M (p<0.05). Los resultados permiten concluir que el porcentaje de maduración nuclear in vitro de oocitos bovinos depende de la dosis de rolipram utilizada, donde la concentración de rolipram 50 M presentó un comportamiento similar a las gonadotropinas en la maduración del oocito...

Gonadotropic follicle stimulating hormone (FSH) and lutenizing hormone (LH) induce intracellular cyclic AMP (cAMP) production during the in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes. Cyclic AMP exerts a dual effect, where high intraoocyte cAMP levels are responsible for oocyte meiotic blockage, while high cAMP levels into the granulose cells induce oocyte maturation. Intracellular cAMP levels are regulated by phosphodiesterases (PDE)-mediated hydrolysis, enzymes having a specific follicle expression pattern. Oocyte expresses typo 3 PDE (PDE 3), while granulose cells expresses type 4 PDE (PDE 4). With the aim to test the effect of the specific PDE 4 inhibitor rolliprom on percentage in vitro nuclear maturation (IVNM) of bovine oocytes, 629 cumulus-oocyte complexes (COC) were cultured at 38.5 ºC/CO2 5%/24 h on TCM-199 medium with pFSH and hrLH with or without rolipram. Experimental groups were: gonadotrophins alone, gonadotropins + rolipram (25, 50, or 75 M), rolipram 50 M + gonadotrophins, and control (media without stimulus). In order to determinate the nuclear maturation percentage by the first polar body expulsion, oocytes were dyed with DAPI and evaluated by fluorescence. Rolipram 50 M stimulated bovine oocyte nuclear maturation in a similar way to gonadotrophins stimulus (76.83 vs. 79.46%, p>0.05) did, but in a higher way than rolipram 25 M (31.25%) or 75 M (28.61%). The COC cultured with rolipram 50 M+gonadotrophins maturated in a lower proportion (63.74%) than did with gonadotropins (p<0.01) or rolipram 50 M (p<0.05). A dose-dependent response of percentage of IVNM of bovine oocytes was detected. Thus rolipram 50 M, exerts a similar effect of gonadotropins on oocyte maturation...

Durante o processo de maturação in vitro de oocitos, as gonadotrofinas FSH e LH induzem a produção de AMPc. O AMPc tem duplo efeito, pois os altos níveis de AMPc intraoocitario mantém o bloqueio meiótico, enquanto que nas células da granulosa induzem a maturação do oocito. Os níveis de AMPc são regulados pela hidrólise mediada das fosfodiesterasas (PDE), as quais apresentam expressão específica no folículo, o oocito expressa a PDE 3, enquanto que as células da granulosa PDE 4. Com o objetivo de avaliar o efeito do rolipram, um inibidor específico de PDE 4, sobre a percentagem de maturação nuclear in vitro (MNIV) de oocitos bovinos, 629 complexos cúmulo oocito (CCO) foram cultivados a 38.5 ºC/5% CO2/24 h, em meio TCM-199 com a adição de pFSH e hrLH, o rolipram. Os grupos experimentais foram: adição de gonadotrofinas, rolipram (25, 50 ó 75 M), rolipram 50 M + gonadotrofinas, ou controle sem estímulo. Os oocitos foram tingidos com DAPI e avaliados sob fluorescência para determinar a percentagem de maturação nuclear pela expulsão do primeiro corpo polar. O rolipram 50M estimulou a maturação nuclear de oocitos bovinos de maneira similar a obtida com as gonadotrofinas (76.83 vs 79.46%, p>0.05), porém em maior medida que a observada com rolipram 25 y 75 M (31.25, y 28.61%, respectivamente). Os CCOs cultivados na presença de rolipram 50 M+Gonadotrofinas maturaram em menor proporção (63.74%) quando comparado com gonadotrofinas (p<0.01) ou rolipram 50 M (p<0.05). Os resultados permitem concluir que a percentagem de maturação nuclear in vitro de oocitos bovinos depende da doses de rolipram utilizada, sendo que a concentração de rolipram 50 M apresentou um comportamento similar às gonadotrofinas na maturação do oocito...

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