RESUMEN

Embriões bovinos produzidos in vitro, em estádio de mórula, foram cultivados em meio contendo anticorpos anti H-Y de alto título proveniente de ratos por 24h e, após este tempo, classificados em dois grupos: 1) embriões inibidos em estádio de mórula (classificados como machos) e 2) embriões que se desenvolveram e formaram a blastocele (classificados como fêmeas). O sexo de 311 embriões, distribuídos em três grupos de concentração dos anticorpos, 3 por cento, 5 por cento ou 7 por cento, foi identificado pela reação em cadeia da polimerase. Não houve desvio da proporção entre machos e fêmeas (P>0,05) nos grupos em que se utilizaram os anticorpos anti H-Y, quando comparadas ao grupo-controle, sem adição de anticorpos anti H-Y. Diferentemente dos resultados obtidos utilizando-se embriões bovinos produzidos in vivo, a sexagem com anticorpos anti H-Y de alto título em embriões produzidos in vitro não propiciou sucesso.

In vitro produced bovine embryos at morula stage were cultured in medium containing high titer of rat H-Y antisera for 24h. The embryos were classified in two groups: 1) embryos arrested at morula stage (classified as males); and 2) embryos that developed and formed a blastocoele (classified as female). The sex of 311 embryos, divided in three groups of concentration of H-Y antisera, 3 percent, 5 percent or 7 percent, was identified by polimerase chain reaction. The results showed no difference (P>0.05) on sexual deviation in groups in which the H-Y antisera was added, in relation to control group, in which no H-Y antisera was added. In contrast with results obtained with in vivo produced bovine embryos, the sexing of in vitro produced bovine embryos with high H-Y antisera titer did not succed.

Asunto(s)

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Murine and bovine embryos at the late morula stage were cultured in medium containing high-titer rat H-Y antisera. After 12h of incubation, embryos blocked at the late morulae stage were classified as males and those at the blastocyst stage were classified as females. Sexing of murine embryos by PCR and cytogenetics revealed that 83% of the embryos classified as males and 82% of those classified as females had their sex correctly predicted (P < 0.05). Bovine embryos were transferred to recipient females. Pregnancy rates were 71.4% (10/14) for embryos classified as males and 68.8% (11/16) for embryos classified as females. The sex was correctly predicted for 80% (8/10) of the embryos classified as males and for 81.8% (9/11) of those classified as females (overall accuracy, 80.9%, P < 0.05). Therefore, the induction of developmental arrest by high-titer male-specific antisera was an efficient strategy for non-invasive embryo sexing. The procedure was straightforward and has considerable commercial potential for sexing bovine embryos.

Asunto(s)

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We evaluated the relationship between follicle size and oocyte recovery (OR) using ultrasound-guided follicle aspiration. Thirty Holstein cows were subjected to OR without gonadotrophic therapy. Oocytes were recovered two to four times from each cow in a total of 67 aspiration sessions. Ovarian follicles with diameters < or =4 mm and >4 mm were aspirated in separated groups. Recovered oocytes from each group were kept separate and submitted to in vitro maturation, fertilization, and culture to the blastocyst stage. A total of 430 follicles were aspirated, of which 154 (35.8%) were from follicles >4 mm and 276 (64.2%) were from follicles < or =4 mm. Seventy-seven oocytes (50%) were recovered from follicles >4 mm and 200 (72.2%) were from follicles < or =4 mm. Nineteen blastocysts were obtained from follicles >4 mm, whereas 45 blastocysts were obtained from follicles < or =4 mm. Recovery rate was greater (P<0.01) in follicles < or =4 mm. Oocyte quality, cleavage rate and blastocyst development did not differ between different follicle sizes. Routine aspiration of small follicles (< or =4 mm) could increase the number of oocytes available for in vitro development.

Asunto(s)

RESUMEN

Avaliaram-se as condiçöes de cultura para maturaçäo dos oócitos (Exp. I) e o efeito do reprodutor (Exp. II) sobre as taxas de clivagem (TC) e de mórulas e blastocistos (MO/BL) produzidos in vitro. Oócitos imaturos foram submetidos a maturaçäo in vitro sob diferentes condiçöes: meio B-199, acrescido de 5 por cento de soro de vaca em estro (SVE), 5 por cento de soro fetal bovino (SFB) e células da granulosa (T1 subscrito/Exp. I) ou meio B-199, acrescido de 10 por cento de SFB, 14 UI/ml de PMSG e 7 UI/ml de hCG (T2 subscrito/Exp I). Após 24 h de cultura, os oócitos maturos foram inseminados com sêmen descongelado de dois reprodutores (R1 subscrito e R2 subscrito/Exp. II) e, após 48 h de incubaçäo, os embriöes de 2 e 4 células foram transferidos para placas de cultivo in vitro, onde permaneceram em cultura por mais 9 dias. No Exp. I, os oócitos de T1 subscrito e T2 subscrito foram inseminados com sêmen do R1 subscrito/Exp. II. No Exp. II, os oócitos do T1 subscrito/Exp. I foram inseminados com sêmen de R1 subscrito e R2 subscrito/Exp. II. No Exp. I, a TC foi superior (p<0,0l) para T2 subscrito, quando comparado com T1 subscrito. A produçäo de MO/BL näo foi diferente (p>0,05) entre tratamentos. No Exp. II, a TC e a taxa de MO/BL diferiram (p<0,05) para cada reprodutor. A adiçäo de hormônios no meio de maturaçäo, embora näo tenha interferido na produçäo de embriöes, parece ser um procedimento mais prático que o uso de células da granulosa. A utilizaçäo de sêmen de diferentes reprodutores afetou o subseqüente desenvolvimento embrionário in vitro

Asunto(s)

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Foram submetidas à colpocitologia 10 gatas, sem raça definida, cedidas pelo Hospital Veterinário Governador Laudo Natel da FCAVJ-UNESP, as quais permaneceram em gatis individuais, recebendo raçäo balanceada e água à vontade. As fases do ciclo estral foram definidas pela identificaçäo e contagem das células epiteliais descamativas da vagina. Neste trabalho, observou-se que o número de células superficiais anucleadas predominaram nas fases de proestro e estro, ao passo que as células superficiais nucleadas foram identificadas em maior número no proestro. Já as células intermediárias e parabasais apresentaram-se em números mais expressivos no metaestro e anestro. Com relaçäo às células parabasais, houve predominância destas na fase de anestro

Asunto(s)