RESUMEN
CONTEXT: Microencapsulation of antigens has been extensively studied over the last decades aiming at improving the immunogenicity of vaccine candidates. OBJECTIVE: Addressing microparticles (MPs) toxicity in rats. MATERIAL AND METHODS: Spray-dried Eudragit® L 30 D-55 MPs and Eudragit® L 30 D-55 alginate MPs were elaborated and characterized. MPs obtained were administered to rats, three groups were defined: G1, control group; G2, administered with Vibrio cholerae (VC)-loaded MPs; G3, receiving VC-loaded alginate MPs. Animals received three vaccine doses. Body weight, food and water intake were controlled during the study. Haematological parameters, vibriocidal titres, organ weight and histology in necropsy were also analyzed. RESULTS: All animals grew healthy. Body weight gain, food and water intake and haematological parameters remained within physiological values, showing no treatment-related differences. Moreover, organ weight changes were not detected and animals developed protective vibriocidal titres. CONCLUSION: VC-loaded MPs and VC-loaded alginate MPs have proved to be safe and effective in the assessed conditions.
Asunto(s)
Vacunas contra el Cólera , Sistemas de Liberación de Medicamentos/efectos adversos , Ácidos Polimetacrílicos , Vibrio cholerae , Animales , Cápsulas , Cólera/prevención & control , Vacunas contra el Cólera/efectos adversos , Vacunas contra el Cólera/química , Vacunas contra el Cólera/farmacología , Relación Dosis-Respuesta a Droga , Masculino , Ácidos Polimetacrílicos/efectos adversos , Ácidos Polimetacrílicos/química , Ratas , Ratas Sprague-DawleyRESUMEN
A vaccine candidate against cholera was developed in the form of oral tablets to avoid difficulties during application exhibited by current whole cell inactivated cholera vaccines. In this study, enteric-coated tablets were used to improve the protection of the active compound from gastric acidity. Tablets containing heat-killed whole cells of Vibrio cholerae strain C7258 as the active pharmaceutical compound was enteric-coated with the polymer Kollicoat(®) MAE-100P, which protected them efficiently from acidity when a disintegration test was carried out. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) anti-lipopolysaccharide (LPS) inhibition test and Western blot assay revealed the presence of V. cholerae antigens as LPS, mannose-sensitive haemagglutinin (MSHA) and outer membrane protein U (Omp U) in enteric-coated tablets. Immunogenicity studies (ELISA and vibriocidal test) carried out by intraduodenal administration in rabbits showed that the coating process of tablets did not affect the immunogenicity of V. cholerae-inactivated cells. In addition, no differences were observed in the immune response elicited by enteric-coated or uncoated tablets, particularly because the animal model and immunization route used did not allow discriminating between acid resistances of both tablets formulations in vivo. Clinical studies with volunteers will be required to elucidate this aspect, but the results suggest the possibility of using enteric-coated tablets as a final pharmaceutical product for a cholera vaccine.
Asunto(s)
Vacunas contra el Cólera/farmacología , Vibrio cholerae/inmunología , Administración Oral , Análisis de Varianza , Animales , Anticuerpos Antibacterianos/sangre , Carga Bacteriana , Western Blotting , Cólera/prevención & control , Vacunas contra el Cólera/química , Vacunas contra el Cólera/inmunología , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática , Humanos , Inmunoglobulina G/sangre , Lipopolisacáridos/inmunología , Conejos , Estadísticas no Paramétricas , Comprimidos Recubiertos/química , Comprimidos Recubiertos/farmacología , Vacunas de Productos Inactivados/química , Vacunas de Productos Inactivados/inmunología , Vacunas de Productos Inactivados/farmacologíaRESUMEN
La enfermedad meningocócica es una afección invasiva, de amplia incidencia mundial, cuyo agente causal es la bacteria gramnegativa Neisseria meningitidis . Existen vacunas polisacarídicas sin conjugar o conjugadas, contra cuatro de los cinco serogrupos responsables del 95 por ciento de los casos en el mundo. Para el serogrupo B, cuyo polisacárido es pobremente inmunogénico, se han evaluado varios candidatos vacunales producidos a base de vesículas de membrana externa. La determinación de la actividad bactericida y la cuantificación de IgG por ELISA han sido los métodos más utilizados en la medición de la respuesta inmune generada por vacunas contra la meningitis meningocócica. El segundo de estos métodos es utilizado en el Instituto Finlay como ensayo de inmunogenicidad para la liberación de lotes de VA-MENGOC-BC®. Como parte de una colaboración con investigadores noruegos, se trabaja en la obtención de un candidato vacunal contra los serogrupos A y W135 , basado en vesículas de membrana externa. En el presente trabajo se describe la estandarización de un ELISA para ser utilizado en la evaluación de la respuesta inmune del candidato vacunal bivalente
Invasive meningococcal disease constitutes a worldwide health problem. Gram negative bacteria, Neisseria meningitidis is the causal agent of this disease. Plain or conjugated polysaccharide vaccines are available against four of five serogroups responsible of more than 95 percent of cases in the world. Because serogroup B polysaccharide is non immunogenic, some vaccine candidates, based on outer membrane proteins have been obtained and evaluated in clinical trials. Bactericidal activity determination and ELISA IgG have been used to evaluate immune response generated by antimeningococcal vaccines. The latter has been used, as potency test, to release VA-MENGOC-BC® vaccine lots, produced at Finlay Institute. As a result of the collaboration with Norwegian researchers, a vaccine candidate based on outer membrane proteins against serogroups A and W135, has been obtained and evaluated in animal models. The current work describes the standardization of an ELISA method to be used in the immune response evaluation of the bivalent vaccinal candidate(AU)
Asunto(s)
Humanos , Neisseria meningitidis Serogrupo A/inmunología , Neisseria meningitidis Serogrupo W-135/inmunología , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática/métodos , Vacunas MeningococicasRESUMEN
The aim of this work was to evaluate the microencapsulation by spray-drying of inactivated Vibrio cholerae, using methacrylic copolymers Eudragit® L30D-55 and FS30D. The microparticles obtained presented a particle size around 3.0 µm. The preparation temperature affected the morphology and the antigenicity of microparticles, but it did not affect the V. cholerae content. In vitro release studies showed that in acid medium less than 5% of bacteria was released, and in neutral medium, Eudragit® L30D-55 microparticles released 86% after 24 h, whereas FS30D released less than 30%. Rats inoculated with microparticles exhibited vibriocidal antibody titres. Microencapsulation by spray-drying of inactivated V. cholerae could be proposed as a method to obtain an oral vaccine which provides controlled release of the bacteria.
Asunto(s)
Vacunas contra el Cólera/administración & dosificación , Vacunas contra el Cólera/inmunología , Cólera/inmunología , Vibrio cholerae/inmunología , Administración Oral , Animales , Cólera/prevención & control , Desecación , Composición de Medicamentos , Viabilidad Microbiana/inmunología , Microesferas , Ácidos Polimetacrílicos , Ratas , Vacunas de Productos Inactivados/inmunologíaRESUMEN
Here we further investigate the pharmacological and toxicological properties of a cholera vaccine based on inactivated whole cells presented in either enteric coated (COA) or uncoated (U/C) tablet formulation from Vibrio cholerae C7258 strain. Tablets were dispersed in 2mL drinking water and administered orally to Sprague Dawley rats distributed in five groups (I COA7, II U/C7 immunized at 0, 7, 69days and III COA14, IV U/C14 immunized at 0, 14, 69days and V control group). Serum vibriocidal antibody response was measured after the administration of two doses with an interval of 7-14days. To further investigate the toxicological aspects a third dose was applied 10 weeks after the initial one. Animals were observed daily and water and food consumption was measured every other day. Periodic blood extractions were performed for hematology, biochemistry, and the titer of serum vibriocidal antibodies was determined. Anatomopathological analysis was performed at days 3 or 14 after the third dose. Results from clinical observations, as well as from water and food consumption and body weigh indicated no toxicity of the vaccine product. Meanwhile, no biological differences were found among different groups in hematological, hemo-chemistry, and anatomopathological studies. Moreover, enteric coated and uncoated tablets against human cholera were found to induce an immune response in rats.
Asunto(s)
Vacunas contra el Cólera/inmunología , Cólera/prevención & control , Administración Oral , Animales , Anticuerpos Antibacterianos/sangre , Vacunas contra el Cólera/toxicidad , Femenino , Inmunización , Masculino , Modelos Animales , Ratas , Ratas Sprague-Dawley , Comprimidos , Vacunas de Productos Inactivados/inmunología , Vacunas de Productos Inactivados/toxicidad , Vibrio cholerae/inmunologíaRESUMEN
BACKGROUND: Cholera remains a global threat and is one of the key indicators of social development. While the disease no longer poses a menace to countries with minimum standards of hygiene, it remains a serious challenge to countries where access to safe drinking water and adequate sanitation cannot be guaranteed. The objective of this work was to analyse the results obtained when contrasting the reports of the World Health Organization (WHO) about cholera disease with those of the World Bank List of economies (countries). METHODOLOGY: Data were obtained from reports of two international organizations, the report on cholera disease incidence of the World Health Organization and the World Bank's classification of countries attending to their income. RESULTS: We determined that low-income countries are more affected by cholera disease than countries with middle or high income. This difference was reflected in the percent of countries, the total number of reported cases, the number of cases per 100,000 habitants, as well as in the reported mortality. These results support the phrase "cholera disease is a disease of poverty." CONCLUSIONS: We consider that economic development is an important factor in the morbidity and mortality of cholera, together with environment, climate, culture, medical management, political intention, and the intrinsic factors of the system.
Asunto(s)
Cólera/epidemiología , Pobreza , Cólera/mortalidad , Países en Desarrollo , Humanos , Incidencia , Factores de Riesgo , Factores SocioeconómicosRESUMEN
A vaccine candidate against the enteric pathogen Vibrio cholerae was developed based on a proteoliposome (PL) formulation using a wild type strain C7258, V. cholerae O1, El Tor Ogawa as part of strategy to develop a combined formulation against enteric diseases preventable by the stimulation of the mucosal immune system. A detergent extraction method was applied to obtain the PL. Scanning electron microscopy and molecular exclusion chromatography showed the presence of two PL populations. Photon correlation spectroscopy studies were then carried out to evaluate the size (169.27+/-3.85nm), polydispersity (0.410) and zeta potential (-23.28+/-1.21mV) of the PL. SDS-PAGE and Western blot analysis revealed the presence of lipopolysaccharide (LPS), mannose-sensitive haemagglutinin (MSHA) and a range of outer membrane proteins, including OmpU. BALB/c mice were immunized intranasally with two doses of PL containing 25mug of LPS each 28 days apart. The mice showed high anti-LPS IgG titres (3.36+/-0.235) and vibriocidal antibodies (3.70+/-0.23) after two weeks from last dose. These results show for the first time that PL can be obtained from V. cholerae O1 and when administer by intranasal route has the potential to protect against this pathogen.
Asunto(s)
Anticuerpos Antibacterianos/sangre , Proteínas de la Membrana Bacteriana Externa/inmunología , Vacunas contra el Cólera , Cólera/prevención & control , Proteolípidos/administración & dosificación , Vibrio cholerae O1/inmunología , Administración Intranasal , Animales , Cólera/inmunología , Vacunas contra el Cólera/administración & dosificación , Vacunas contra el Cólera/inmunología , Femenino , Ratones , Ratones Endogámicos BALB CRESUMEN
En el Instituto Finlay se desarrolló una metodología de trabajo que contribuyó a la selección de cepas de Shigellasonnei como posibles candidatos vacunales contra la shigellosis. Las cepas investigadas, donadas por el Centro Provincial de Higiene y Epidemiología de Ciudad de La Habana, se caracterizaron según los métodos convencionales. La identificación del serogrupo y serotipo se realizó por aglutinación en láminas portaobjetos con antisueros comerciales; mientras que para el estudio de la susceptibilidad antimicrobiana se utilizó el DIRAMIC 10, un equipo semiautomatizado que proporcionó los resultados 4 horas después de su realización. Se investigó también la presencia de plásmidos de virulencia, por el crecimiento de Shigella spp. en medio de agar Triptona Soya con Rojo Congo al 0,025 por ciento, así como la expresión de las proteínas de la membrana externa en SDS-PAGE; para las pruebas de virulencia y potencia se emplearon los modelos animales (modelo ratón-pulmón y Test de Sereny). Los resultados obtenidos conla metodología utilizada permitieron la selección de la cepa de S sonnei A-04 como la más adecuada para la obtencióndel posible candidato vacunal(AU)
A work methodology was developed at Finlay Institute that contributed to the selection of Shigella sonnei strains as possible vaccinal candidates against shigellosis. Strains under study , were donated by the provincial Centre of Hygiene and Epidemiology in the City of Havana and were characterized using traditional methods. The identification and of the serogroup and serotype was performed by agglutination in slides with commercial antisera. Whereas DIRAMIC 10, a semi automatedequipment was used to study antimicrobial susceptibility. Results were obtained four hours after. The presence of virulence plasmid for the growth of Shigella spp. In Agar Soy Triptone with Congo Red at 0,025 percent, as well as outer membrane protein expression in of SDS-PAGE. In addition, animal models mice-lung and the test of Sereny were used for virulence and potency tests. Results obtained allowed the selection of the strain S sonnei A-04 as the most adequate for the obtainment of a possible vaccinal candidate(AU)
Asunto(s)
Shigella sonnei/inmunología , Shigella sonnei/aislamiento & purificación , Vacunas contra la Shigella/uso terapéuticoRESUMEN
El cólera continúa siendo en muchos países un problema para la salud humana, manteniéndose como una enfermedad epidémica o endémica que afecta tanto a niños como adultos y causa la muerte en casos no tratados. Una vacuna viva oral contra esta enfermedad puede ser la solución. En el presente trabajo se seleccionó y aplicó un biomodelo para la evaluación de cepas atenuadas genéticamente de Vibrio cholerae como candidatas vacunales contra el cólera. La virulencia, capacidad de colonización y adherencia a la mucosa intestinal de las cepas fueron evaluadas mediante el usode ratones neonatos de 2 a 4 días de nacidos de la línea Balb/c, con un peso entre 1,5-2 g. Los resultados obtenidos con este biomodelo demostraron que las cepas atenuadas genéticamente son no virulentas, colonizan y se adhieren a lamucosa intestinal. Se concluye que el biomodelo utilizado permite la evaluación y selección de cepas candidatas para vacunas vivas orales contra el cólera(AU)
Cholera is still a human health problem in many countries. It is an epidemic or endemic disease affecting both children and adults that causes death of untreated cases. A live oral vaccine could be the solution against this disease. In the present study a biomodel was selected and applied for the evaluation of genetically attenuated Vibrio cholerae strains as vaccinecandidates. The virulence, colonizing capacity and adherence to the intestinal mucosa of the strains were evaluated using 2-4 day-old neonatal Balb/c mice, weighing from 1.5-2 g. The results obtained with this biomodel showed that genetically attenuated strains are not virulent, colonize and adhere to the intestinal mucosa. The conclusion was that the biomodel used allows the evaluation and selection of candidate strains for live oral cholera vaccines(AU)
Asunto(s)
Animales , Ratones , Cólera , Modelos Biológicos , Vibrio cholerae/aislamiento & purificación , Vacunas contra el Cólera/uso terapéuticoRESUMEN
Pseudomonas aeruginosa constituye uno de los agentes patógenos oportunistas de mayor frecuencia de aislamiento en los diversos procesos infecciosos, por lo que es reconocido como un gran problema de salud a nivel mundial. Al no existir un fármaco de alta efectividad ni vacunas disponibles contra esta bacteria, se emplea una terapia con inmunoglobulinas polivalentes comerciales que de forma combinada con los antibióticos contribuyen a eliminar la infección, aunque los preparados disponibles en el mercado no contienen concentraciones suficientemente elevadas de anticuerpos específicos contra este microorganismo. En este trabajo se llevó a cabo la evaluación en un modelo animal de una inmunoglobulina anti-Pseudomonas aeruginosa para uso terapéutico mediante un ensayo de reto con una cepa virulenta. Se evaluó dosis y vía de administración de la misma, así como el valor profiláctico o terapéutico de los anticuerpos. Esta gammaglobulina resultó ser protectora en animales mostrando una sobreviviencia cercana a un 75 por ciento en comparación con el grupo control no protegido y además se logra eliminar el estado de portador en los individuos infectados(AU)
Asunto(s)
Inmunoglobulinas/uso terapéuticoRESUMEN
La transferencia de genes representa una importante herramienta para el estudio, prevención y tratamiento de enfermedades genéticas y adquiridas así como para estudios relacionados con la función de proteínas de interés. El uso de moléculas catiónicas está ampliamente difundido, ya que su eficiencia en la transfección las convierte en un fuerte rival de otros métodos de transferencia de genes. En este trabajo se transfectaron las líneas celulares COS-7 y BHK-21 con el plásmido psnEGFP que usó los polímeros catiónicos polietilenimina (PEI) y DEAE dextrana. Al medir la eficiencia de transfección se observó que la línea celular BHK-21 deviene en una excelente opción para la transfección con el método de la PEI y que los mejores resultados se obtienen al disolver PEI en NaCl 150 mM. Al centrifugar las placas después de añadidos los complejos ADN-PEI se obtiene cerca del 100(por ciento) de células transfectadas con bajas concentraciones de ADN(AU)
Asunto(s)
Técnicas In Vitro , Técnicas de Transferencia de Gen , Enfermedades Genéticas Congénitas/prevención & controlRESUMEN
En la actualidad existen dos variantes principales de vacunas orales contra el cólera: una basada en células inactivadas de diferentes biotipos y serotipos y otra basada en la administración de cepas vivas genéticamente atenuadas. Una vacuna por subunidades pudiera ser una variante muy atractiva. Este trabajo describe la purificación parcial y caracterización preliminar de extractos de proteínas de membrana externa-lipopolisacárido (PME-LPS), obtenidos a partir de Vibrio cholerae O1, con el interés de seleccionar un proteoliposoma que posteriormente será estructurado en forma de cocleatos para su uso por vía oral en humanos. Las preparaciones fueron obtenidas a través del uso de diferentes detergentes. La cantidad de LPS en cada preparación fue estimada mediante la determinación de las unidades endotóxicas en el ensayo del Limulus (LAL). La composición de cada muestra fue evaluada mediante SDS-PAGE y Dot Blot. La inoculación intranasal (IN) en ratones Balb/c se utilizó para la evaluación de la inmunogenicidad de las preparaciones, y la respuesta inmune fue determinada por ELISA y el título de anticuerpos vibriocidas. El tamaño molecular de la preparación con mejores resultados en inmunogenicidad se estimó mediante la cromatografía en Sephacryl S-1000. Se obtuvieron diferentes perfiles electroforéticos de acuerdo con el tipo de detergente utilizado. El LPS fue identificado en todas las preparaciones y aquella obtenida con el SDS al 15(por ciento) mostró la más baja relación proteínas/LPS y los mejores resultados en los ensayos de inmunogenicidad. Adicionalmente se comprobó que su tamaño molecular es similar al observado en el proteoliposoma de VAMENGOC-BC. La preparación obtenida con el SDS al 15(por ciento) constituye un proteoliposoma, con capacidad para estimular altos nivelesde anticuerpos IgG anti-LPS y altos títulos de anticuerpos vibriocidas, luego de su administración por vía intranasal en ratones. Estos resultados constituyen un importante paso en las investigaciones dirigidas a la obtención de una vacuna por subunidades, como alternativa preventiva contra el cólera(AU)
Asunto(s)
Animales , Ratones , Vibrio cholerae O1/inmunología , Vacunas contra el CóleraRESUMEN
An evolutionary, diachronic approach to the phenotypic craniofacial pattern arisen in a human population after high levels of admixture and gene flow was achieved by means of geometric morphometrics. Admixture has long been studied after molecular data. Nevertheless, few efforts have been made to explain the morphological outcome in human craniofacial samples. The Spanish-Amerindian contact can be considered a good scenario for such an analysis. Here we present a comparative analysis of craniofacial shape changes observed between two putative ancestor groups, Spanish and precontact Aztecs, and two diachronic admixed groups, corresponding to early and late colonial periods from the Mexico's Central Valley. Quantitative shape comparisons of Amerindian, Spanish, and admixed groups were used to test the expectations of quantitative genetics for admixture events. In its simplest form, this prediction states that an admixed group will present phenotypic values falling between those of both parental groups. Results show that, in general terms, although the human skull is a complex, integrated structure, the craniofacial morphology observed fits the theoretical expectations of quantitative genetics. Thus, it is predictive of population structure and history. In fact, results obtained after the craniofacial analysis are in accordance with previous molecular and historical interpretations, providing evidence that admixture is a main microevolutionary agent influencing modern Mexican gene pool. However, expectations are not straightforward when moderate shape changes are considered. Deviations detected at localized structures, such as the upper and lower face, highlight the evolution of a craniofacial pattern exclusively inherent to the admixed groups, indicating that quantitative characters might respond to admixture in a complicated, nondirectional way.
Asunto(s)
Evolución Biológica , Craneología , Genética de Población , Fenotipo , Dinámica Poblacional , Cráneo/anatomía & histología , Biometría , Historia del Siglo XV , Historia del Siglo XVII , Historia del Siglo XIX , Humanos , Indígenas Norteamericanos , México , Población BlancaRESUMEN
Se desarrolló una metodología para la selección de cepas de Vibrio cholerae O1 y O139 modificadas genéticamente, con el objetivo de obtener candidatos vacunales atenuados orales contra el cólera. A las cepas modificadas se les realizó caracterización microbiológica, susceptibilidad bacteriana y diferentes pruebas biológicas (dosis letal media, capacidad colonizadora, adherencia en ratones, intestino ligado e inoculación intraduodenal en conejos como pruebas de virulencia y potencia). Las cepas 81, 638, 638T y 1333 fueron evaluadas en ensayos clínicos para determinar su reactogenicidad e inmunogenicidad. Todas las cepas fueron sensibles a la tetraciclina y doxiclicina y mostraron su atenuación e inmunogenicidad en modelos animales, resultando las cepas 638 y 1333 inmunogénicas y no reactogénicas en voluntarios(AU)
Asunto(s)
Vibrio cholerae/inmunología , Vacunas , Modelos Animales , Ensayos Clínicos como AsuntoRESUMEN
Se desarrolló una metodología para la selección de cepas de Vibrio cholerae O1 y O139 modificadas genéticamente, con el objetivo de obtener candidatos vacunales atenuados orales contra el cólera. A las cepas modificadas se les realizó caracterización microbiológica, susceptibilidad bacteriana y diferentes pruebas biológicas (dosis letal media, capacidad colonizadora, adherencia en ratones, intestino ligado e inoculación intraduodenal en conejos como pruebas de virulencia y potencia). Las cepas 81, 638, 638T y 1333 fueron evaluadas en ensayos clínicos para determinar su reactogenicidad e inmunogenicidad. Todas las cepas fueron sensibles a la tetraciclina y doxiclicina y mostraron su atenuación e inmunogenicidad en modelos animales, resultando las cepas 638 y 1333 inmunogénicas y no reactogénicas en voluntarios
Asunto(s)
Ensayos Clínicos como Asunto , Modelos Animales , Vacunas , Vibrio choleraeRESUMEN
Vibrio cholerae 638 is a living candidate cholera vaccine strain attenuated by deletion of the CTXPhi prophage from C7258 (O1, El Tor Ogawa) and by insertion of the Clostridium thermocellum endoglucanase A gene into the hemagglutinin/protease coding sequence. This vaccine candidate was previously found to be well tolerated and immunogenic in volunteers. This article reports a randomized, double-blind, placebo-controlled trial conducted to test short-term protection conferred by 638 against subsequent V. cholerae infection and disease in volunteers in Cuba. A total of 45 subjects were enrolled and assigned to receive vaccine or placebo. The vaccine contained 10(9) CFU of freshly harvested 638 buffered with 1.3% NaHCO(3), while the placebo was buffer alone. After vaccine but not after placebo intake, 96% of volunteers had at least a fourfold increase in vibriocidal antibody titers, and 50% showed a doubling of at least the lipopolysaccharide-specific immunoglobulin A titers in serum. At 1 month after vaccination, five volunteers from the vaccine group and five from the placebo group underwent an exploratory challenge study with 10(9) CFU of DeltaCTXPhi attenuated mutant strain V. cholerae 81. Only two volunteers from the vaccine group shed strain 81 in their feces, but none of them experienced diarrhea; in the placebo group, all volunteers excreted the challenge strain, and three had reactogenic diarrhea. An additional 12 vaccinees and 9 placebo recipients underwent challenge with 7 x 10(5) CFU of virulent strain V. cholerae 3008 freshly harvested from a brain heart infusion agar plate and buffered with 1.3% NaHCO(3). Three volunteers (25%) from the vaccine group and all from the placebo group shed the challenge agent in their feces. None of the 12 vaccinees but 7 volunteers from the placebo group had diarrhea, and 2 of the latter exhibited severe cholera (>5,000 g of diarrheal stool). These results indicate that at 1 month after ingestion of a single oral dose (10(9) CFU) of strain 638, volunteers remained protected against cholera infection and disease provoked by the wild-type challenge agent V. cholerae 3008. We recommend that additional vaccine lots of 638 be prepared under good manufacturing practices for further evaluation.
Asunto(s)
Vacunas contra el Cólera/administración & dosificación , Vacunas contra el Cólera/inmunología , Cólera/prevención & control , Vibrio cholerae/inmunología , Administración Oral , Adolescente , Adulto , Anticuerpos Antibacterianos/sangre , Bacteriófagos/genética , Celulasa/genética , Vacunas contra el Cólera/genética , Clostridium thermocellum , Método Doble Ciego , Heces/microbiología , Eliminación de Gen , Hemaglutininas/genética , Humanos , Masculino , Péptido Hidrolasas/genética , Vacunación , Vacunas Atenuadas/administración & dosificación , Vacunas Atenuadas/genética , Vacunas Atenuadas/inmunología , Vibrio cholerae/genética , Vibrio cholerae/patogenicidad , Vibrio cholerae/virologíaRESUMEN
A methodology was developed for the selection of genetically modified strains of Vibrio cholerae 01 and 0139 aimed at obtaining oral attenuated candidate vaccines against cholera. The modified strains underwent microbiological characterization, bacterial susceptibility and different biological tests (mean lethal dose, colonizing capacity, adherence in mice, ligated intestine and intraduodenal inoculation in rabbits as virulence and potency tests. The strains 81, 638, 638T and 1333 were evaluated in clinical trials to determine their reactogenicity and immunogenicity. All the strains were sensitive to tetracycline and doxoclycine. They showed their attenuation and immunogenicity in animal models. The strains 638 and 1333 proved to be immunogenic and non reactogenic in volunteers.
Asunto(s)
Vacunas contra el Cólera , Cólera/prevención & control , Vibrio cholerae/inmunología , Administración Oral , Análisis de Varianza , Animales , Vacunas contra el Cólera/administración & dosificación , Vacunas contra el Cólera/efectos adversos , Vacunas contra el Cólera/genética , Vacunas contra el Cólera/inmunología , Vacunas contra el Cólera/aislamiento & purificación , Interpretación Estadística de Datos , Doxiciclina/farmacología , Humanos , Ratones , Microscopía Electrónica de Transmisión , Modelos Animales , Conejos , Tetraciclina/farmacología , Vacunas Atenuadas , Vibrio cholerae/efectos de los fármacos , Vibrio cholerae/genética , Vibrio cholerae/ultraestructuraRESUMEN
En la producción de biológicos, especialmente en aquellos obtenidos a partir de microorganismos, resulta imprescindible contar con un suministro de células caracterizado y estable, como punto de partida para la producción. El concepto de Sistema de Lotes de Siembra en dos niveles, en el cual el Lote de Siembra de Referencia es usado para generar el Lote de Siembra de Trabajo, es considerado el enfoque más práctico para lograr este propósito. En este trabajo se elaboraron los Lotes de Siembra de Referencia y de Trabajo de la cepa vacunal Vibrio cholerae 638, primera etapa de la fabricación de una vacuna contra el cólera, cumpliendo con los requerimientos de Buenas Prácticas de Producción (BPP), lo que constituye una exigencia de las autoridadesregulatorias nacionales e internacionales. La caracterización de los lotes demostró que se lograron adecuados niveles de viabilidad y se conservaron inalterables las características de la cepa original en cuanto a identidad, pureza, atenuación de su virulencia, capacidad de colonizar el intestino delgado de ratones lactantes y de inducir una respuesta inmune(AU)
Asunto(s)
Animales , Técnicas In Vitro , Vibrio cholerae , BioensayoRESUMEN
El Instituto Finlay posee un grupo de cepas atenuadas candidatas a vacuna oral contra el cólera, las cuales fueron evaluadas desde el punto de vista de su capacidad inmunogénica mediante la determinación de anticuerpos por el método ELISA y principalmente por el ensayo Vibriocida. Este ensayo mide la funcionalidad de los anticuerpos estimulados por la cepa vacunal, por lo que se considera la herramienta más eficaz para medir el estado de la inmunidad en individuos vacunados contra el cólera y constituye el soporte analítico para el desarrollo de la vacuna anticolérica cubana. En este trabajo se evaluaron la precisión, la especificidad y la robustez del ensayo y los resultados obtenidos estuvieron dentro del criterio de aceptación de esta técnica (>50(por ciento) de coincidencia). Se demostró que las variaciones entre las muestras negativas y positivas se debían precisamente al crecimiento de V. cholerae y que se pueden incorporar pequeños cambios al ensayo sin que esto traiga consigo variaciones en el título de la muestra ni falsos resultados. De acuerdo con los resultados obtenidos, el mismo se considera apto para la evaluación de la respuesta inmune estimulada por un candidato vacunal contra el cólera(AU)
Asunto(s)
Humanos , Masculino , Femenino , Anticuerpos , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática , Vacunas contra el Cólera , Vibrio choleraeRESUMEN
Para evaluar la respuesta inmunológica de cualquier candidato vacunal es necesario contar en el laboratorio con técnicas estandarizadas y validadas. Es por ello que en este trabajo se realizaron los ensayos para la estandarización del ELISA indirecto, usado para la determinación de anticuerpos séricos anti-LPS Ogawa contra cólera en suero de humanos inoculados por vía oral, así como la evaluación de los parámetros de validación típicos de este ensayo. Para la selección de las condiciones óptimas se evaluaron la concentración de recubrimiento, condiciones de bloqueo y dilución de conjugado, con el objetivo de seleccionar las mejores respuestas para el control positivo, el control negativo y el blanco en cada caso. Una concentración de 25 µg/mL de LPS Ogawa en PBS, como recubrimiento, durante toda la noche; leche descremada al 0,5(por ciento) en PBS, 30 min a temperatura ambiente como bloqueo y el conjugado anti-IgA-HRP diluido 1:5000, resultaron las variables óptimas para el ensayo. En cuanto a la validación de la técnica los parámetros evaluados fueron precisión, exactitud, límite de detección, especificidad y robustez. Para ello se siguió un protocolo de validación que permitiera evaluarlos, y en todos los casos el ensayo se consideró adecuado, siempre y cuando el coeficiente de variación resultara ser menor del 20(por ciento). En todos los parámetros evaluados se cumplió con este requisito, considerando así los resultados confiables y reproducibles(AU)