RESUMEN
The human immunodeficiency virus (HIV) epidemic has altered the epidemiological profile of tuberculosis in both industrialized and developing countries. Serious diseases caused by mycobacteria other than Mycobacterium tuberculosis, mostly belonging to the M. avium-intracellulare complex (MAC), have become very common in association with severe immunosuppression. The increase in mycobacterial disease complexity has stimulated the development of more rapid and efficient methods for diagnosis. In the present study, we investigated and assessed the suitability of a gas-liquid chromatography technique for diagnosis of clinically important mycobacteria in Argentina. An identification scheme was developed from the results obtained in a previous study where we characterized the cellular fatty acids and the mycolic acid cleavage products from most frequent species in Argentina. Of 183 isolates tested, 69% were correctly identified to species level and 5% were incorrectly classified. If we only take into account the isolates that could be identified, 93% were correctly identified. Although all of the isolates of M. tuberculosis were correctly identified, four isolates of MAC incorrectly matched by M. tuberculosis. Gas chromatography provides a rapid technique of highly predictive value for mycobacteria identification; it could be used in reference laboratories as a rapid presumptive identification until the biochemical tests are completed.
Asunto(s)
Cromatografía de Gases , Mycobacterium/aislamiento & purificación , Humanos , Sensibilidad y EspecificidadRESUMEN
El virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) causa un profundo impacto sobre el problema de la tuberculosis tanto en los países industrializados como en los en vías de desarrollo. Enfermedades graves causadas por micobacterias no tuberculosas, la mayoría correspondiente al complejo Mycobacterium avium-intracellulare (MAC), se han vuelto muy comunes en asociación con la inmunosupresión severa. El aumento de la complejidad de las enfermedades micobacterianas ha estimulado el desarrollo de métodos de diagnóstico más rápidos y eficientes. En el presente estudio se caracterizaron los ácidos grasos y los productos de degradación de los ácidos micólicos celulares de las especies micobacterianas más frecuentes en la Argentina empleando cromatografía gaseosa (CG), para luego poder desarrollar una técnica rápida de identificación de especies. Los ácidos grasos y los ácidos micólicos de las células micobacterianas saponificadas fueron analizados como ésteres metílicos por CG capilar. Los principales ácidos grasos detectados en todas las especies estudiadas, con excepción de M. smegmatis, fueron los ácidos octadecenoico (18:1) y hexadecanoico (16:0). Los perfiles cromatográficos presentaron diferencias cuantitativas y no cualitativas entre las distintas especies. El ácido tuberculoesteárico se detectó en todas las micobacteias analizadas. Se observaron diferencias significativas (p<0,01) en las medias de las cantidades relativas de algunos ácidos grasos entre aislamientos clínicos de M. tuberculosis, M. bovis y MAC. Se detectaron trazas de 2-elcosanol en cepas de M. tuberculosis H37Rv. Aunque se estudió un número limitado de cepas y de especies, los resultados preliminares indican que este método podría ser usado para caracterizar cultivos micobacterianos (AU)
Asunto(s)
Mycobacterium/aislamiento & purificación , Cromatografía de Gases , Ácidos Grasos/aislamiento & purificación , Ácidos Micólicos/aislamiento & purificación , Tuberculosis/diagnósticoRESUMEN
El virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) causa un profundo impacto sobre el problema de la tuberculosis tanto en los países industrializados como en los en vías de desarrollo. Enfermedades graves causadas por micobacterias no tuberculosas, la mayoría correspondiente al complejo Mycobacterium avium-intracellulare (MAC), se han vuelto muy comunes en asociación con la inmunosupresión severa. El aumento de la complejidad de las enfermedades micobacterianas ha estimulado el desarrollo de métodos de diagnóstico más rápidos y eficientes. En el presente estudio se caracterizaron los ácidos grasos y los productos de degradación de los ácidos micólicos celulares de las especies micobacterianas más frecuentes en la Argentina empleando cromatografía gaseosa (CG), para luego poder desarrollar una técnica rápida de identificación de especies. Los ácidos grasos y los ácidos micólicos de las células micobacterianas saponificadas fueron analizados como ésteres metílicos por CG capilar. Los principales ácidos grasos detectados en todas las especies estudiadas, con excepción de M. smegmatis, fueron los ácidos octadecenoico (18:1) y hexadecanoico (16:0). Los perfiles cromatográficos presentaron diferencias cuantitativas y no cualitativas entre las distintas especies. El ácido tuberculoesteárico se detectó en todas las micobacteias analizadas. Se observaron diferencias significativas (p<0,01) en las medias de las cantidades relativas de algunos ácidos grasos entre aislamientos clínicos de M. tuberculosis, M. bovis y MAC. Se detectaron trazas de 2-elcosanol en cepas de M. tuberculosis H37Rv. Aunque se estudió un número limitado de cepas y de especies, los resultados preliminares indican que este método podría ser usado para caracterizar cultivos micobacterianos
Asunto(s)
Ácidos Grasos/aislamiento & purificación , Ácidos Micólicos/aislamiento & purificación , Cromatografía de Gases , Mycobacterium/aislamiento & purificación , Tuberculosis/diagnósticoRESUMEN
The human immunodeficiency virus (HIV) epidemic has altered the epidemiological profile of tuberculosis in both industrialized and developing countries. Serious diseases caused by mycobacteria other that M. tuberculosis, mostly belonging to the M. avium-intracellulare complex (MAC), have become very common in association with severe immunosuppression. The increase in mycobacterial disease complexity has stimulated the development of more rapid and efficient methods of diagnosis. In the present study we characterized the cellular fatty acids and the mycolic acid cleavage product from most frequent mycobacteria species in Argentina using gas chromatography in order to develop a rapid technique for their identification. Fatty acids and mycolic acids extracted from saponified mycobacterial cells were examined as methyl esters by capillary has chromatography. The major constituent fatty acids in all species, with the exception of M. smegmatis, were octadecenoic (18:1) and hexadecanoic (16:1) acids. The fatty acids and mycolic acid cleavage product profiles from the studied species were quantitatively but not qualitatively different. Tuberculostearic acid was found in all species. Significantly different amounts of some fatty acids (p < 0.01) were observed among clinical isolates of M. tuberculosis, M. bovis and MAC. Traces of 2-eicosanol were detected in the M. tuberculosis H37Rv strain. Although a limited number of strains and species were tested, preliminary results indicate that this method could be used to characterize mycobacterial cultures.