RESUMEN
The molecular basis of pathogen-induced host cell apoptosis is well characterized for a number of microorganisms. Mycobacterium tuberculosis is known to induce apoptosis and it was shown that live but not heat killed M. tuberculosis stimulates this biological pathway in monocytes. The dependence of this activity on live bacilli led us to hypothesize that products released or secreted by M. tuberculosis are the primary apoptotic factors for human monocytes. Thus, the culture filtrate of in vitro grown M. tuberculosis strain H37Rv was fractioned by conventional chromatography and the apoptosis-inducing activity of individual fractions was measured on human monocytes. The tests employed included measurement of cell membrane damage, caspase activation, and cytokine release. Small molecular weight RNAs of M. tuberculosis were recognized as the predominant apoptosis inducing factors. The RNA was comprised primarily of tRNA and rRNA fragments that stably accumulate in the culture filtrate during early log-phase growth. The RNA fragments signaled through a caspase-8 dependent, caspase-1 and TNF-α independent pathway that ultimately compromised the human monocytes' ability to control M. tuberculosis infection. These studies provide the first report of bacterial RNA inducing apoptosis. They also provide a foundation to pursue pathways for secretion or release of nucleic acids from M. tuberculosis and the impact of secreted RNA fragments on pathogenesis.
Asunto(s)
Apoptosis/efectos de los fármacos , Caspasa 8/metabolismo , Espacio Extracelular/metabolismo , Monocitos/enzimología , Monocitos/microbiología , Mycobacterium tuberculosis/metabolismo , ARN Bacteriano/farmacología , Cromatografía de Afinidad , Concanavalina A , Espacio Extracelular/efectos de los fármacos , Humanos , Cinética , Monocitos/citología , Monocitos/efectos de los fármacos , Mycobacterium tuberculosis/efectos de los fármacos , ARN Bacteriano/aislamiento & purificación , Sefarosa , Tuberculosis/enzimología , Tuberculosis/microbiología , Factor de Necrosis Tumoral alfa/farmacologíaRESUMEN
Taenia solium has a complex life cycle. Its cysticercus can lodge in the brain, causing neurocysticercosis (NCC), and the adult tapeworm's survival in the intestine results in taeniasis. In this study, the in situ detection of previously described glycoprotein antigens used for serological diagnosis of NCC and the detection of other glycoconjugates was explored in cysticerci and the surrounding porcine tissue to understand their potential role in pathogenesis. Immunohistochemistry with an antiserum specific for glycoprotein antigens rich in N-linked carbohydrates and in situ histochemistry with a battery of lectins that have affinity to a variety of glycoconjugates were performed. The glycoconjugates rich in N-linked carbohydrates were detected in the vesicular fluid and tegument of the vesicular membrane and scolex, where the parasite has direct contact with the host tissues during cysticercosis and taeniasis, respectively. Additionally, as the inflammatory response progressed, the parasite's antigenic glycoproteins were also detected in the cytoplasm of inflammatory cells in the surrounding granuloma. In contrast, the spiral canal tegument, which will be exposed to intestinal enzymes in taeniasis, had N-acetyl-galactosamine-rich mucins. Thus, the differential saccharidic composition in T. solium metacestode structures may be important for the survival of the parasite in different host sites.
Asunto(s)
Antígenos Helmínticos/análisis , Cisticercosis/inmunología , Cysticercus/inmunología , Glicoproteínas/análisis , Taenia solium/inmunología , Animales , Antígenos Helmínticos/inmunología , Antígenos Helmínticos/aislamiento & purificación , Western Blotting , Cisticercosis/parasitología , Epítopos/análisis , Epítopos/inmunología , Glicoconjugados/análisis , Glicoconjugados/inmunología , Glicoconjugados/aislamiento & purificación , Glicoproteínas/inmunología , Glicoproteínas/aislamiento & purificación , Interacciones Huésped-Parásitos/inmunología , Sueros Inmunes/biosíntesis , Sueros Inmunes/inmunología , Inmunohistoquímica , Lectinas/inmunología , PorcinosRESUMEN
La neurocisticercosis es una infección causada por el cisticerco de la T. Solium y puede confundirse con otras afecciones del sistema nervioso central. Las glicoproteínas de 12-28 kD de este parásitos son útiles para el diagnóstico serológico de la neurocisticercosis. Estas glicoproteínas contiene abundantes carbohidratos asociados vía asparagina (tipo N). Objetivo: Determinar la contribución de los carbahidratos tipo N en la antigenicidad de las glicoproteínas. Materiales y Métodos: se purificaron las glicoproteínas de 12, 16 y 18 kD de los cisticercos utilizando un gel preparativo de poliacrilamida y se sometieron a deglicosilación enzimática con PNGase F. Luego se evaluaron los cambios en antigenicidad entre las proteínas nativas y deglicosiladas por Western blot. Resultados: los antígenos deglicosilados redujeron su peso molecular a 7 kD y perdieron parte de su antigenicidad. Esta reducción fue más notoria para la proteína de 18 kD. La cual tiene mayor contenido de carbohidratos que la de 12 y 16 kD. Conclusión: estos resultados sugieren que los carbohidratos no sólo contribuyen a la antigenicidad, sino que además causan un bloqueo estérico que inhibe que el sistema inmune detecte otros epítopes no expuesto. Estos datos sugieren que la antigenicidad de las glicoproteínas de T. Solium se debe a una combinación de epítopes sacarídicos y probablemente proteicos