RESUMEN

Due to the increasing use of in vitro embryo production (IVEP) and the importance of crossbreeding for beef production, pregnancy rates of Nelore recipients were evaluated following Fixed Time Embryo Transfer with fresh or vitrified IVEP embryos produced with Y-sorted sperm of Angus bulls (B. taurus) or Fixed Time Artificial Insemination using non-sorted sperm. For IVEP in Experiment 1, oocytes were obtained using Ovum Pick Up (OPU) (n = 84 embryos) or from ovaries from a slaughterhouse (SLAUGHTER, n = 66 embryos). In Experiment 2, with oocytes obtained by OPU, IVEP embryos were fresh (FRESH, n = 271) or after vitrification/warming (VITRIFIED, n = 79) and PR was compared with FTAI (n = 239). In Experiment 1, cleavage rates were 63.8% and 39.1% for OPU and SLAUGHTER groups, respectively (P = 0.02), and blastocyst rates were 30.5% and 14.7%, respectively (P = 0.09). The PR was similar when considering the source of oocytes (OPU = 35.7%; SLAUGHTER = 25.8%; P = 0.17). In Experiment 2, there was no difference in PR for FRESH or VITRIFIED embryos (34.3% and 30.4%, respectively, P = 0.72), but lesser than FTAI (47.7, P = 0.002). It is concluded that the IVEP with Y-sorted sperm associated with vitrification or embryos produced with oocytes from different sources did not affect PR when there was transfer of crossbred embryos into recipients, and can optimize large-scale application of IVEP technology; however, FTAI pregnancy rates with non-sex sorted sperm were greater.

Asunto(s)

Cruzamientos Genéticos , Técnicas de Cultivo de Embriones/veterinaria , Fertilización In Vitro/veterinaria , Inseminación Artificial/veterinaria , Preselección del Sexo/veterinaria , Animales , Bovinos , Femenino , Técnicas de Maduración In Vitro de los Oocitos/veterinaria , Masculino , Embarazo , Preselección del Sexo/métodos

RESUMEN

A utilização do sêmen refrigerado (SR) cresce a cada dia, no entanto mais estudos são necessários para validar e viabilizar o uso em massa desta biotécnica, garantindo aumento dos índices de prenhez, quando utilizamos sêmen refrigerado comparado com o sêmen congelado de um mesmo touro. A membrana plasmática é a parte da estrutura do espermatozoide mais susceptível a modificações durante o processo de criopreservação, as quais são causadas por alterações de temperatura induzidas sobre as células (curva de resfriamento e congelamento, além do processo de pós-descongelamento), ou seja, em última análise, ocorre a diminuição da viabilidade das células, principalmente, porque a membrana espermática é submetida a rearranjos estruturais envolvendo lípideos e proteínas. Assim, quanto menor for o processamento, mais células viáveis estarão disponíveis no momento da fecundação e, consequentemente, aumentará a prenhez. Na tentativa de diminuir as perdas celulares, o uso do sêmen refrigerado ressurge com a possibilidade de aumentar a prenhez nos protocolos de IATF.

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The use of cooled semen (CS) has been increase every day, however more researches are needed to validate and spread this biotech, improves pregnancy rates higher than when compared to the frozen semen of same bull. Plasma membrane is the part of the sperm structure most susceptible to modifications during the cryopreservation process caused by changes in temperature that the cell undergoes (cooling and freezing curve besides the process of post-thawing), that is, in the last analysis, there is a decrease in cell viability, mainly because the sperm membrane is submitted to structural rearrangements involving lipids and proteins. Thus, the smaller the processing, the more viable cells will be available at the time of fertilization and consequently, the pregnancy will increase. In an attempt to decrease cell losses, the use of cooled semen resurfaces with the possibility of increasing pregnancy in the IATF protocols.

Asunto(s)

Masculino , Animales , Bovinos , Análisis de Semen , Bovinos/fisiología , Preservación de Semen/métodos , Preservación de Semen/veterinaria , Preñez

RESUMEN

O Projeto Mais Precoce é constituído por dois projetos executados por uma equipe de pesquisadores da Embrapa em parceria com outras instituições como Universidades e Associações. O primeiro projeto, denominado Mais Cria, é liderado pela Embrapa Pantanal, com objetivo de aumentar a produção e produtividade de bezerros, visto que a região é caracterizada como “matrizeiro” (produção de bezerros que serão vendidos para o Planalto). O segundo projeto, denominado Mais Engorda, é liderado pela Embrapa Gado de Corte, com objetivo de receber os bezerros de diferentes sistemas, inclusive do Pantanal, e levá-los até a terminação, comparando sistemas e custos de produção. Executado desde 2014 pelos pesquisadores, a proposta busca alinhar-se aos problemas enfrentados pela cadeia do novilho precoce, um programa estadual Precoce MS, que serve de incentivo à produção no novilho precoce. Os produtores aprovados no programa recebem isenção do Imposto Sobre Circulação de Mercadorias e Serviços (ICMS) de 16% a 67% do valor total pago sobre os animais. As bonificações são concedidas com base em critérios que avaliam fatores como o processo produtivo e a tipificação da carcaça. Por isso reproduzir/produzir animais bem avaliados é o começo para o produtor rural poder se inscrever no programa de incentivo fiscal, além de ter que atender a critérios como estar com as obrigações fiscais, tributárias, sanitárias, trabalhistas da fazenda regularizadas e possuir um responsável técnico pela propriedade. O foco desta revisão será o projeto Mais Cria, visto que o mesmo contempla vários experimentos de reprodução animal.

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Mais Precoce consists of two projects executed by Embrapa researchers in partnership with other institutions, such as Universities, and Associations. The first project, denominated Mais Cria, is conducted by Embrapa Pantanal, with the objective of increasing the production and productivity of calves, because the region is characterized as "matrizeiro" (production of calves). The second project, denominated Mais Engorda, is conduct by Embrapa Gado de Corte, to receive calves from different systems, including the Pantanal, and bring them to completion, comparing systems and production costs. Executed since 2014, the proposal seeks to align itself with the problems faced by the precocious steer chain, a state program MS Precoce, which serves as an incentive to the production in the precocious steer. Producers approved in the program receive exemption from the Tax on Circulation of Services and Goods (ICMS) from 16% to 67% of the total value paid on the animals. Bonuses are granted based on criteria that assess factors such as the production process and the carcass typing. So reproducing / producing well-evaluated animals is the beginning for the rural producer to be able to enroll in the fiscal incentive program, in addition to having to meet criteria such as being taxed, tax, sanitary, farm labor regularized and have a technician responsible property. The focus of this review will be Mais Cria project, since it contemplates several experiments of animal reproduction.

Asunto(s)

Animales , Lactante , Bovinos , Bovinos/crecimiento & desarrollo , Bovinos/metabolismo , Inseminación Artificial/métodos , Inseminación Artificial/veterinaria

RESUMEN

O Projeto Mais Precoce é constituído por dois projetos executados por uma equipe de pesquisadores da Embrapa em parceria com outras instituições como Universidades e Associações. O primeiro projeto, denominado Mais Cria, é liderado pela Embrapa Pantanal, com objetivo de aumentar a produção e produtividade de bezerros, visto que a região é caracterizada como “matrizeiro” (produção de bezerros que serão vendidos para o Planalto). O segundo projeto, denominado Mais Engorda, é liderado pela Embrapa Gado de Corte, com objetivo de receber os bezerros de diferentes sistemas, inclusive do Pantanal, e levá-los até a terminação, comparando sistemas e custos de produção. Executado desde 2014 pelos pesquisadores, a proposta busca alinhar-se aos problemas enfrentados pela cadeia do novilho precoce, um programa estadual Precoce MS, que serve de incentivo à produção no novilho precoce. Os produtores aprovados no programa recebem isenção do Imposto Sobre Circulação de Mercadorias e Serviços (ICMS) de 16% a 67% do valor total pago sobre os animais. As bonificações são concedidas com base em critérios que avaliam fatores como o processo produtivo e a tipificação da carcaça. Por isso reproduzir/produzir animais bem avaliados é o começo para o produtor rural poder se inscrever no programa de incentivo fiscal, além de ter que atender a critérios como estar com as obrigações fiscais, tributárias, sanitárias, trabalhistas da fazenda regularizadas e possuir um responsável técnico pela propriedade. O foco desta revisão será o projeto Mais Cria, visto que o mesmo contempla vários experimentos de reprodução animal.(AU)

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Mais Precoce consists of two projects executed by Embrapa researchers in partnership with other institutions, such as Universities, and Associations. The first project, denominated Mais Cria, is conducted by Embrapa Pantanal, with the objective of increasing the production and productivity of calves, because the region is characterized as "matrizeiro" (production of calves). The second project, denominated Mais Engorda, is conduct by Embrapa Gado de Corte, to receive calves from different systems, including the Pantanal, and bring them to completion, comparing systems and production costs. Executed since 2014, the proposal seeks to align itself with the problems faced by the precocious steer chain, a state program MS Precoce, which serves as an incentive to the production in the precocious steer. Producers approved in the program receive exemption from the Tax on Circulation of Services and Goods (ICMS) from 16% to 67% of the total value paid on the animals. Bonuses are granted based on criteria that assess factors such as the production process and the carcass typing. So reproducing / producing well-evaluated animals is the beginning for the rural producer to be able to enroll in the fiscal incentive program, in addition to having to meet criteria such as being taxed, tax, sanitary, farm labor regularized and have a technician responsible property. The focus of this review will be Mais Cria project, since it contemplates several experiments of animal reproduction.(AU)

Asunto(s)

Animales , Lactante , Bovinos , Bovinos/crecimiento & desarrollo , Bovinos/metabolismo , Inseminación Artificial/métodos , Inseminación Artificial/veterinaria

RESUMEN

A utilização do sêmen refrigerado (SR) cresce a cada dia, no entanto mais estudos são necessários para validar e viabilizar o uso em massa desta biotécnica, garantindo aumento dos índices de prenhez, quando utilizamos sêmen refrigerado comparado com o sêmen congelado de um mesmo touro. A membrana plasmática é a parte da estrutura do espermatozoide mais susceptível a modificações durante o processo de criopreservação, as quais são causadas por alterações de temperatura induzidas sobre as células (curva de resfriamento e congelamento, além do processo de pós-descongelamento), ou seja, em última análise, ocorre a diminuição da viabilidade das células, principalmente, porque a membrana espermática é submetida a rearranjos estruturais envolvendo lípideos e proteínas. Assim, quanto menor for o processamento, mais células viáveis estarão disponíveis no momento da fecundação e, consequentemente, aumentará a prenhez. Na tentativa de diminuir as perdas celulares, o uso do sêmen refrigerado ressurge com a possibilidade de aumentar a prenhez nos protocolos de IATF.(AU)

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The use of cooled semen (CS) has been increase every day, however more researches are needed to validate and spread this biotech, improves pregnancy rates higher than when compared to the frozen semen of same bull. Plasma membrane is the part of the sperm structure most susceptible to modifications during the cryopreservation process caused by changes in temperature that the cell undergoes (cooling and freezing curve besides the process of post-thawing), that is, in the last analysis, there is a decrease in cell viability, mainly because the sperm membrane is submitted to structural rearrangements involving lipids and proteins. Thus, the smaller the processing, the more viable cells will be available at the time of fertilization and consequently, the pregnancy will increase. In an attempt to decrease cell losses, the use of cooled semen resurfaces with the possibility of increasing pregnancy in the IATF protocols.(AU)

Asunto(s)

Animales , Masculino , Bovinos , Bovinos/fisiología , Preservación de Semen/métodos , Preservación de Semen/veterinaria , Análisis de Semen , Preñez

RESUMEN

Although genetic manipulation of farm animals is of great interest for animal production and the pharmaceutical industry, its efficiency remains far from satisfactory. Pronuclear injection, which is the most widely used technique for such modification, mainly in mice, remains limited for this species. Some alternatives have been developed such as sperm mediated gene transfer, in which the spermatozoa are used as vectors for DNA delivery during in vitro fertilization. Mature sperm cells are able to spontaneously bind exogenous DNA molecules which may be internalized into sperm nuclei. Given the potential of sperm mediated gene transfer for livestock animals transgenesis, the aim of this study was to evaluate four methods of DNA uptake for sperm mediated gene transfer in bovine: incubation with DNA, plasma membrane alteration induced by calcium ionophore followed by incubation with DNA, electroporation and lipofection. Spermatozoa not exposed to exogenous DNA were used as control group. Cleavage, blastocyst and hatching rates were recorded at 72 hours post insemination (hpi), days 9 and 12 of embryo culture, respectively. Exogenous DNA-positive embryos were evaluated by PCR. No effect of treatment was observed on cleavage, blastocyst and hatching rates. In addition, percentage of DNA positive blastocysts did not differ among experimental groups. In spite of the low number of positive embryos, our results show that all treatments presented similar efficiencies for DNA delivery during in vitro fertilization. In conclusion, although the development rates were similar and constant in all groups, other factors such as exogenous DNA sequence, size and concentration should be considered to improve sperm mediated gene transfer.

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Apesar da manipulação genética de animais domésticos ser de grande interesse para a produção animal e para a indústria farmacêutica, a sua eficiência ainda é insatisfatória. A injeção pronuclear, a técnica mais utilizada para tal propósito, principalmente em camundongos, ainda apresenta limitações para esta espécie. Algumas alternativas têm sido desenvolvidas como o uso de espermatozoides como vetores para transferência gênica, na qual a célula espermática tem habilidade espontânea de se ligar à molécula de DNA e internalizá-la. Dado o potencial da transferência gênica mediada por espermatozoide para animais domésticos transgênicos, o objetivo do presente trabalho foi a avaliação de quatro métodos de incorporação de DNA para a transferência gênica mediada por espermatozoides na espécie bovina: incubação com DNA, alteração da membrana plasmática induzida por cálcio ionóforo seguida por incubação com o DNA exógeno, eletroporação e lipofecção. Espermatozoides não expostos ao DNA exógeno foram usados como grupo controle. Os índices de clivagem, blastocisto e eclosão foram avaliados, respectivamente, as 72 horas após a inseminação dos oócitos, bem como, aos 9 e 12 dias de cultivo embrionário. Os embriões positivos para o DNA exógeno foram avaliados por PCR. Nenhum efeito de tratamento foi observado nos índices de clivagem, blastocisto e eclosão. Além disso, a porcentagem de blastocistos positivos para o DNA exógeno não diferiu entre os grupos experimentais. Apesar do baixo número de embriões positivos para DNA exógeno, os resultados obtidos mostram que todos os tratamentos apresentaram eficiências similares. A conclusão obtida foi que, apesar de os índices de desenvolvimento embrionário terem sido similares e constante em todos os grupos experimentais, outros fatores como a sequência, o tamanho e a concentração do DNA exógeno devem ser avaliados para melhorar a transferência gênica mediada por espermatozoides.

Asunto(s)

Animales , Bovinos , Bovinos/genética , Espermatozoides/fisiología , Transferencia Intrafalopiana del Cigoto/veterinaria , Investigaciones con Embriones , Técnicas In Vitro/veterinaria

RESUMEN

The aim of this work was to evaluate the effect of cryopreservation protocols on subsequent development of in vitro produced bovine embryos under different culture conditions. Expanded in vitro produced blastocysts (n = 600) harvested on days 7-9 were submitted to controlled freezing [slow freezing group: 10% ethylene glycol (EG) for 10 min and 1.2°C/min cryopreservation]; quick-freezing [rapid freezing group: 10% EG for 10 min, 20% EG + 20% glycerol (Gly) for 30 s]; or vitrification [vitrification group: 10% EG for 10 min, 25% EG + 25% Gly for 30 s] protocols. Control group embryos were not exposed to cryoprotectant or cryopreservation protocols and the hatching rate was evaluated on day 12 post-insemination. In order to evaluate development, frozen-thawed embryos were subjected to granulosa cell co-culture in TCM199 or SOFaa for 4 days. Data were analyzed by PROC MIXED model using SAS Systems for Windows®. Values were significant at p < 0.05. The hatching rate of the control group was 46.09%. In embryos cultured in TCM199, slow freezing and vitrification group hatching rates were 44.65 ± 5.94% and 9.43 ± 6.77%, respectively. In embryos cultured in SOFaa, slow freezing and vitrification groups showed hatching rates of 11.65 ± 3.37 and 8.67 ± 4.47%, respectively. In contrast, the rapid freezing group embryos did not hatch, regardless of culture medium. The slow freezing group showed higher hatching rates than other cryopreservation groups. Under such conditions, controlled freezing (1.2°C/min) can be an alternative to cryopreservation of in vitro produced bovine embryos.

Asunto(s)

Blastocisto/citología , Criopreservación/métodos , Técnicas de Cultivo de Embriones/métodos , Fertilización In Vitro , Animales , Blastocisto/efectos de los fármacos , Bovinos , Crioprotectores/farmacología , Medios de Cultivo , Glicol de Etileno/farmacología , Femenino , Congelación , Glicerol , Células de la Granulosa/citología , Vitrificación

RESUMEN

O objetivo deste estudo foi avaliar a maturação e o desenvolvimento embrionário após a fecundação in vitro de oócitos bovinos que tiveram a maturação bloqueada com Butirolactona I e Roscovitina em meio de pré-maturação suplementado com soro fetal bovino (SFB). Oócitos foram divididos em 4 grupos: Controle 0 hora, Controle (maturação por 24 horas), Butirolactona I (bloqueio da maturação com 150μM de Butirolactona I por 24 horas, seguido de 24 horas de maturação) e Roscovitina (bloqueio da maturação com 50μM de Roscovitina por 24 horas, seguido de 24 horas de maturação). Para avaliar a maturação nuclear, os oócitos foram fixados e corados em aceto orceína. Parte dos oócitos dos grupos Controle 24 horas, Roscovitina e Butirolactona I após o período de maturação, foi fecundado in vitro. O desenvolvimento embrionário foi avaliado pelos índices de clivagem (D3) e formação de blastocistos (D7). Oócitos do grupo Butirolactona I apresentaram índices de Vesícula Germinativa após o bloqueio e de Metáfase 2 após a maturação semelhantes ao dos grupos Controle 0 hora e Controle, respectivamente. Por outro lado, a Roscovitina apresentou menores índices de Vesícula Germinativa e Metáfase 2. Os grupos Controle e Butirolactona I apresentaram maiores índices de clivagens. O grupo Controle apresentou maior produção de blastocistos que o Roscovitina e não diferiu do grupo Butirolactona I. Conclui-se que a Butiroloactona I pode ser utilizada no sistema de pré-maturação em meio contendo SFB, pois apresentou resultados semelhantes ao do grupo Controle o mesmo não ocorrendo com a Roscovitina, que apresentou menores índices de maturação oocitária e de desenvolvimento embrionário.

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This study evaluated the bovine oocyte maturation and embryo development after in vitro fertilization. The maturation of the oocytes was blocked using Butyrolactone I and Roscovitine using pre-maturation medium supplemented with fetal calf serum (FCS). The ocytes were divided in four groups: Control 0 hour, Control (24 hours of maturation), Roscovitine (maturation blockage with 50mM Roscovitine during 24 hours followed by 24 hours of maturation), and Butyrolactone I (maturation blockage with 150mM Butyrolactone I during 24 hours followed by 24 hours of maturation). The oocytes were fixed and stained with aceto orcein to evaluate the nuclear maturation. After the maturation period, the remaining oocytes of the Control group, Roscovitine, and Butyrolactone I were fertilized in vitro. Embryo development was assessed by the cleavage rate (D3) and blastocysts formation (D7). The Butyrolactone I group had similar rates of germinal vesical stage oocytes during blockage, and Metaphase 2 after maturation, comparing to Control group at 0 hour and Control group, respectively. On the other hand, the Roscovitine group had lower rates of vesical stage oocytes during blockage, and Metaphase 2 after maturation comparing to Control groups. After in vitro fertilization, higher rates of cleavage were observed in Control and Butyrolactone I groups. For the blastocyst formation rate, the Control group showed better results than Roscovitine group. In summary, Butyrolactone I group had similar results to the Control group, and for this reason, is suitable for pre-maturation of bovine oocytes using FCS. In contrast, Roscovitine group had lower oocyte maturation and embryo development.

Asunto(s)

Animales , Bovinos/clasificación , Desarrollo Embrionario , Técnicas de Maduración In Vitro de los Oocitos/métodos

RESUMEN

O objetivo deste estudo foi avaliar a maturação e o desenvolvimento embrionário após a fecundação in vitro de oócitos bovinos que tiveram a maturação bloqueada com Butirolactona I e Roscovitina em meio de pré-maturação suplementado com soro fetal bovino (SFB). Oócitos foram divididos em 4 grupos: Controle 0 hora, Controle (maturação por 24 horas), Butirolactona I (bloqueio da maturação com 150μM de Butirolactona I por 24 horas, seguido de 24 horas de maturação) e Roscovitina (bloqueio da maturação com 50μM de Roscovitina por 24 horas, seguido de 24 horas de maturação). Para avaliar a maturação nuclear, os oócitos foram fixados e corados em aceto orceína. Parte dos oócitos dos grupos Controle 24 horas, Roscovitina e Butirolactona I após o período de maturação, foi fecundado in vitro. O desenvolvimento embrionário foi avaliado pelos índices de clivagem (D3) e formação de blastocistos (D7). Oócitos do grupo Butirolactona I apresentaram índices de Vesícula Germinativa após o bloqueio e de Metáfase 2 após a maturação semelhantes ao dos grupos Controle 0 hora e Controle, respectivamente. Por outro lado, a Roscovitina apresentou menores índices de Vesícula Germinativa e Metáfase 2. Os grupos Controle e Butirolactona I apresentaram maiores índices de clivagens. O grupo Controle apresentou maior produção de blastocistos que o Roscovitina e não diferiu do grupo Butirolactona I. Conclui-se que a Butiroloactona I pode ser utilizada no sistema de pré-maturação em meio contendo SFB, pois apresentou resultados semelhantes ao do grupo Controle o mesmo não ocorrendo com a Roscovitina, que apresentou menores índices de maturação oocitária e de desenvolvimento embrionário.(AU)

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This study evaluated the bovine oocyte maturation and embryo development after in vitro fertilization. The maturation of the oocytes was blocked using Butyrolactone I and Roscovitine using pre-maturation medium supplemented with fetal calf serum (FCS). The ocytes were divided in four groups: Control 0 hour, Control (24 hours of maturation), Roscovitine (maturation blockage with 50mM Roscovitine during 24 hours followed by 24 hours of maturation), and Butyrolactone I (maturation blockage with 150mM Butyrolactone I during 24 hours followed by 24 hours of maturation). The oocytes were fixed and stained with aceto orcein to evaluate the nuclear maturation. After the maturation period, the remaining oocytes of the Control group, Roscovitine, and Butyrolactone I were fertilized in vitro. Embryo development was assessed by the cleavage rate (D3) and blastocysts formation (D7). The Butyrolactone I group had similar rates of germinal vesical stage oocytes during blockage, and Metaphase 2 after maturation, comparing to Control group at 0 hour and Control group, respectively. On the other hand, the Roscovitine group had lower rates of vesical stage oocytes during blockage, and Metaphase 2 after maturation comparing to Control groups. After in vitro fertilization, higher rates of cleavage were observed in Control and Butyrolactone I groups. For the blastocyst formation rate, the Control group showed better results than Roscovitine group. In summary, Butyrolactone I group had similar results to the Control group, and for this reason, is suitable for pre-maturation of bovine oocytes using FCS. In contrast, Roscovitine group had lower oocyte maturation and embryo development.(AU)

Asunto(s)

Animales , Técnicas de Maduración In Vitro de los Oocitos/métodos , Desarrollo Embrionario , Bovinos/clasificación

RESUMEN

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da temperatura (37 ou 38,5°C) de fecundação in vitro (FIV) e da retirada das células do cumulus oophorus após a FIV ou após doze horas de cultivo embrionário (CIV), nos índices de poliespermia e no desenvolvimento de embriões suínos in vitro. Para a FIV, incubaram-se oócitos e espermatozoides em duas temperaturas (37 ou 38,5ºC). Após as oito horas de FIV, metade dos zigotos de cada grupo teve as células do cumulus oophorus retiradas e foi colocada em meio de cultivo NCSU23. Colocou-se a outra metade apenas em meio de cultivo e ambos os grupos foram mantidos nas mesmas temperaturas da FIV. Após doze horas de CIV, retiraram-se as células do restante dos zigotos e aferiram-se os índices de poliespermia, de todos os grupos. Na segunda etapa do experimento, os zigotos permaneceram em cultivo para avaliação do desenvolvimento embrionário. Não houve efeito da temperatura de FIV e da retirada das células do cumulus oophorus após doze horas de cultivo nos índices de poliespermia e no desenvolvimento embrionário (p<0,05). Concluiu-se que a temperatura de FIV e a presença das células do cumulus oophorus pós-fecundação não interferiram nos índices de poliespermia e no desenvolvimento embrionário.

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Effects of in vitro fertilization (IVF) temperature and cumulus oophorus cells removal after IVF or 12 h of embryo culture (IVC) on polyspermy and embryo development rates were evaluated in swine. Oocytes and spermatozoa were incubated at 37 or 38.5ºC during IVF procedure. Cumulus oophorus cells were removed from 50% of zygotes of each group 8 hours after IVF and all zygotes were cultured with NCSU23 media. Polyspermy rates were assessed after 12 hours of IVC, when cumulus oophorus cells were removed from the rest of zygotes. In a second experiment, embryos remained in culture for the evaluation of embryo development. No effects of IVF temperature or cumulus oophorus cells removal were observed after 12 hours of IVC on polyspermy and embryo development (p<0.05). In conclusion, IVF temperature and the presence of cumulus oophorus cells after IVF do not interfere on polyspermy and embryo development rates.

Asunto(s)

Desarrollo Embrionario , Fertilización In Vitro/métodos , Porcinos , Temperatura

RESUMEN

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da temperatura (37 ou 38,5°C) de fecundação in vitro (FIV) e da retirada das células do cumulus oophorus após a FIV ou após doze horas de cultivo embrionário (CIV), nos índices de poliespermia e no desenvolvimento de embriões suínos in vitro. Para a FIV, incubaram-se oócitos e espermatozoides em duas temperaturas (37 ou 38,5ºC). Após as oito horas de FIV, metade dos zigotos de cada grupo teve as células do cumulus oophorus retiradas e foi colocada em meio de cultivo NCSU23. Colocou-se a outra metade apenas em meio de cultivo e ambos os grupos foram mantidos nas mesmas temperaturas da FIV. Após doze horas de CIV, retiraram-se as células do restante dos zigotos e aferiram-se os índices de poliespermia, de todos os grupos. Na segunda etapa do experimento, os zigotos permaneceram em cultivo para avaliação do desenvolvimento embrionário. Não houve efeito da temperatura de FIV e da retirada das células do cumulus oophorus após doze horas de cultivo nos índices de poliespermia e no desenvolvimento embrionário (p<0,05). Concluiu-se que a temperatura de FIV e a presença das células do cumulus oophorus pós-fecundação não interferiram nos índices de poliespermia e no desenvolvimento embrionário.(AU)

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Effects of in vitro fertilization (IVF) temperature and cumulus oophorus cells removal after IVF or 12 h of embryo culture (IVC) on polyspermy and embryo development rates were evaluated in swine. Oocytes and spermatozoa were incubated at 37 or 38.5ºC during IVF procedure. Cumulus oophorus cells were removed from 50% of zygotes of each group 8 hours after IVF and all zygotes were cultured with NCSU23 media. Polyspermy rates were assessed after 12 hours of IVC, when cumulus oophorus cells were removed from the rest of zygotes. In a second experiment, embryos remained in culture for the evaluation of embryo development. No effects of IVF temperature or cumulus oophorus cells removal were observed after 12 hours of IVC on polyspermy and embryo development (p<0.05). In conclusion, IVF temperature and the presence of cumulus oophorus cells after IVF do not interfere on polyspermy and embryo development rates.(AU)

Asunto(s)

Fertilización In Vitro/métodos , Desarrollo Embrionario , Temperatura , Porcinos

RESUMEN

This study evaluated in vitro maturation of pig oocytes in two maturation media (TCM199 and NCSU23) supplemented with 10% porcine follicular fluid (pFF) or 0.1% polyvinyl alcohol (PVA) and four hormonal treatments. The best media was then used to evaluate the effect of reversible meiosis inhibitors cycloheximide (5 microgram/ml) [DOSAGE ERROR CORRECTED]and butyrolactone I (12.5M) on the maturation of pig oocytes was evaluated. After maturation for 44 h, the oocytes were fixed, stained, and examined under epifluorescence microscopy. The comparison of the proportion of oocytes in metaphase II revealed that hormonal treatment 2(incubation for 22 h - 10 ng EGF/ml, 10 IU hCG/ml and 10 IU eCG/ml, followed by incubation for 22 h - 10 ng EGF/ml) presented higher repeatability percentages: TCM+ PVA (54.5% - 61/112); TCM+ pFF (65.0% - 63/97);NCSU23 + PVA (54.6% - 65/119), and NCSU23 + pFF (58.1% - 61/105). The comparison of maturation media showed that TCM199 presented more constant results than NCSU23. Regarding supplementation with pFF or PVA, TCM199 with pFF presented better results. The comparison between butyrolactone I and cycloheximide demonstrated that both drugs effectively inhibited meiosis; however, only cycloheximide presented metaphase II percentages similar to the control (70.29% and 75.49%, respectively). In conclusion, it is recommended the use of TCM199 medium supplemented with pFF and hormonal treatment with 10 ng EGF/ml, 10 UI hCG/mland 10 UI eCG/ml during the first 22 h and more 22 h with 10 ng EGF/ml for the pig oocytes maturation. Butyrolactone I and cycloheximide effectively arrested/resumpted maturation; however, the oocytes percentages in metaphase II was the same for both cycloheximide and the control groups.

Asunto(s)

Medios de Cultivo/química , Técnicas de Cultivo de Embriones/veterinaria , Meiosis/efectos de los fármacos , Oocitos , 4-Butirolactona/análogos & derivados , 4-Butirolactona/farmacología , Animales , Gonadotropina Coriónica/farmacología , Cicloheximida/farmacología , Relación Dosis-Respuesta a Droga , Técnicas de Cultivo de Embriones/métodos , Factor de Crecimiento Epidérmico/farmacología , Femenino , Fertilización In Vitro/veterinaria , Líquido Folicular/fisiología , Gonadotropinas Equinas/farmacología , Microscopía Fluorescente/veterinaria , Oocitos/efectos de los fármacos , Oocitos/crecimiento & desarrollo , Alcohol Polivinílico/farmacología , Inhibidores de la Síntesis de la Proteína/farmacología , Porcinos , Factores de Tiempo

RESUMEN

Research on different cryoprotectants and their associations is important for successful vitrification, since greater cryoprotectant concentration of vitrification solution may be toxic to oocytes. The aim of the present research was to compare the efficiency of immature bovine oocyte vitrification in different associations of ethylene glycol (EG), glycerol and dimethylsulfoxide (Me(2)SO). In the first experiment, oocytes were exposed to the cryoprotectant for either 30 or 60s in final solutions of EG+DMSO1 (20% EG+20% Me(2)SO) or EG+DMSO2 (25% EG+25% Me(2)SO) or EG+GLY (25% EG+25% glycerol). In the second experiment, the oocytes were vitrified in open pulled straws (OPS) using 30s exposure of final solutions of EG+DMSO1 or EG+DMSO2 or EG+GLY. Maturation rates of 30s exposure groups were not different from the control, but 60s cryoprotectant exposure was toxic, decreasing maturation rates. The vitrification with EG+DMSO2 resulted in enhanced maturation rate (29.2%) as compared with EG+DMSO1 (11.7%) and EG+GLY (4.3%) treatments. These data demonstrate that concentration and type of cryoprotectant have important effects on the developmental competence of vitrified oocytes.

Asunto(s)

Bovinos/fisiología , Criopreservación/veterinaria , Crioprotectores/farmacología , Oocitos/efectos de los fármacos , Animales , Criopreservación/métodos , Crioprotectores/química , Dimetilsulfóxido/química , Dimetilsulfóxido/farmacología , Glicol de Etileno/química , Glicol de Etileno/farmacología , Femenino , Glicerol/química , Glicerol/farmacología , Oocitos/citología , Oocitos/fisiología

RESUMEN

O objetivo deste trabalho foi estudar a remoção do crioprotetor, em duas ou três etapas, em embriões bovinos produzidos in vitro após a congelação em vapor de Nirtogênio. Blastocistos expandidos (1329) foram mantidos em co-cultivo (controle) ou criopreservados em 3 protocolos de congelação em vapor de nitrogênio. Os embriões foram equilibrados na solução de 10% de EG por 10 minutos e em 17%, 22% ou 28% de EG por 30 segundos. Após o envase, as palhetas foram mantidas em vapor de nitrogênio por 2 minutos e armazenadas em nitrogênio líquido. Após a descongelação, os crioprotetores foram diluídos em duas etapas, usando 0,3M de sacarose e solução isotônica ou em três etapas usando 0,3M de sacarose + 10% de EG; 0,3M de sacarose e solução isotônica. Os embriões foram co-cultivados com células da granulosa, avaliando as taxas de re-expansão após 24 horas e de eclosão após 24, 48, 72 e 96 horas. Para os grupos congelados no vapor e diluição do crioprotetor em duas etapas, as taxas de eclosão foram de 1,94; 11,88 e 6,06% para EG17, EG 22 e EG 28 respectivamente. Já para os grupos com diluição do crioprotetor em três etapas, as taxas de eclosão foram de 4,67; 9,90 e 10,78% para EG17, EG22 e EG28 respectivamente.

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The aim of this study was to evaluate the dilution of cryoprotectant in 2 or steps of bovine in vitro-produced embryos after quick-freezing. A total of 1329 expanded blastocyst were kept in co-culture as control group or cryopreserved by 3 quick-freezing protocols. The embryos were exposed to 10% EG for 10 minutes then to 17%, 22% or 28% for 30 seconds. After loading, the straws were held in nitrogen vapor for 2 minutes and then plunged and stored in liquid nitrogen. After warming, cryoprotectants were diluted in two steps using 0.3 M sucrose and isotonic solution, or three steps using 0.3 M sucrose + 10% EG then 0.3 M sucrose and isotonic solution. Embryos were co-cultured on a granulosa cell monolayer and evaluated after 24 hours for re-expansion and at 24, 48, 72 and 96 hours of co-culture for hatching rates. The in vitro survival rates of embryos cryopreserved by the quick-freezing method and two-step cryoprotectant dilution were 1.94; 11.88 and 6.06%, for EG17, EG22 and EG28 groups, respectively. At the three step dilution, the in vitro survival rates were 4.67; 9.90 and 10.78% for EG17, EG22 and EG28 groups, respectively.

Asunto(s)

Bovinos , Criopreservación/veterinaria , Desarrollo Embrionario/fisiología , Estructuras Embrionarias/embriología

RESUMEN

O objetivo deste trabalho foi estudar a remoção do crioprotetor, em duas ou três etapas, em embriões bovinos produzidos in vitro após a congelação em vapor de Nirtogênio. Blastocistos expandidos (1329) foram mantidos em co-cultivo (controle) ou criopreservados em 3 protocolos de congelação em vapor de nitrogênio. Os embriões foram equilibrados na solução de 10% de EG por 10 minutos e em 17%, 22% ou 28% de EG por 30 segundos. Após o envase, as palhetas foram mantidas em vapor de nitrogênio por 2 minutos e armazenadas em nitrogênio líquido. Após a descongelação, os crioprotetores foram diluídos em duas etapas, usando 0,3M de sacarose e solução isotônica ou em três etapas usando 0,3M de sacarose + 10% de EG; 0,3M de sacarose e solução isotônica. Os embriões foram co-cultivados com células da granulosa, avaliando as taxas de re-expansão após 24 horas e de eclosão após 24, 48, 72 e 96 horas. Para os grupos congelados no vapor e diluição do crioprotetor em duas etapas, as taxas de eclosão foram de 1,94; 11,88 e 6,06% para EG17, EG 22 e EG 28 respectivamente. Já para os grupos com diluição do crioprotetor em três etapas, as taxas de eclosão foram de 4,67; 9,90 e 10,78% para EG17, EG22 e EG28 respectivamente.(AU)

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The aim of this study was to evaluate the dilution of cryoprotectant in 2 or steps of bovine in vitro-produced embryos after quick-freezing. A total of 1329 expanded blastocyst were kept in co-culture as control group or cryopreserved by 3 quick-freezing protocols. The embryos were exposed to 10% EG for 10 minutes then to 17%, 22% or 28% for 30 seconds. After loading, the straws were held in nitrogen vapor for 2 minutes and then plunged and stored in liquid nitrogen. After warming, cryoprotectants were diluted in two steps using 0.3 M sucrose and isotonic solution, or three steps using 0.3 M sucrose + 10% EG then 0.3 M sucrose and isotonic solution. Embryos were co-cultured on a granulosa cell monolayer and evaluated after 24 hours for re-expansion and at 24, 48, 72 and 96 hours of co-culture for hatching rates. The in vitro survival rates of embryos cryopreserved by the quick-freezing method and two-step cryoprotectant dilution were 1.94; 11.88 and 6.06%, for EG17, EG22 and EG28 groups, respectively. At the three step dilution, the in vitro survival rates were 4.67; 9.90 and 10.78% for EG17, EG22 and EG28 groups, respectively

Asunto(s)

Animales , Bovinos , Criopreservación/veterinaria , Desarrollo Embrionario/fisiología , Estructuras Embrionarias/embriología , Bovinos