RESUMEN

A gota citoplasmática é uma protuberância de citoplasma geralmente posicionada na peça intermediária dos espermatozoides. É considerada uma organela transitória, uma vez que migra pelo espermatozoide durante o trânsito epididimário, quando é removida dessas células na maioria dos mamíferos. Dúvidas sobre se a presença desta gota está relacionada de forma positiva ou negativa com a função e fertilidade espermática são frequentes, já que sua presença no ejaculado pode afetar a fertilidade espermática e o uso do sêmen em biotécnicas da reprodução. Porém, mesmo não sendo totalmente compreendida a nível molecular e funcional, sabe-se que a gota citoplasmática é necessária ao espermatozoide durante seu processo de maturação no epidídimo. Por isso, o objetivo desta revisão foi abordar pontos sobre a fisiologia e funções das gotas citoplasmáticas, bem como relacionar sua presença com a maturação e fertilidade dos espermatozoides.

The cytoplasmic droplet is a protuberance of cytoplasm usually positioned in the sperm midpiece. It is considered a transient organelle that migrates through the sperm cell during its epididymal transit when it is finally removed from the cell in most mammals. Doubts over whether the presence of cytoplasmic droplets is positively or negatively related to sperm functions and fertility are common, as its presence in the ejaculate may affect sperm fertility and the use of semen in assisted reproductive technology. Although the understanding of cytoplasmic droplets function is not fully clarified at molecular and functional levels, it is known that cytoplasmic droplet is necessary for spermatozoa, especially during their maturation in the epididymal duct. Therefore, the aim of this review was to discuss aspects of the physiology and function of cytoplasmic droplets, as well as to relate their presence to sperm maturation and their consequent fertility.

Asunto(s)

RESUMEN

A gota citoplasmática é uma protuberância de citoplasma geralmente posicionada na peça intermediária dos espermatozoides. É considerada uma organela transitória, uma vez que migra pelo espermatozoide durante o trânsito epididimário, quando é removida dessas células na maioria dos mamíferos. Dúvidas sobre se a presença desta gota está relacionada de forma positiva ou negativa com a função e fertilidade espermática são frequentes, já que sua presença no ejaculado pode afetar a fertilidade espermática e o uso do sêmen em biotécnicas da reprodução. Porém, mesmo não sendo totalmente compreendida a nível molecular e funcional, sabe-se que a gota citoplasmática é necessária ao espermatozoide durante seu processo de maturação no epidídimo. Por isso, o objetivo desta revisão foi abordar pontos sobre a fisiologia e funções das gotas citoplasmáticas, bem como relacionar sua presença com a maturação e fertilidade dos espermatozoides.(AU)

The cytoplasmic droplet is a protuberance of cytoplasm usually positioned in the sperm midpiece. It is considered a transient organelle that migrates through the sperm cell during its epididymal transit when it is finally removed from the cell in most mammals. Doubts over whether the presence of cytoplasmic droplets is positively or negatively related to sperm functions and fertility are common, as its presence in the ejaculate may affect sperm fertility and the use of semen in assisted reproductive technology. Although the understanding of cytoplasmic droplets function is not fully clarified at molecular and functional levels, it is known that cytoplasmic droplet is necessary for spermatozoa, especially during their maturation in the epididymal duct. Therefore, the aim of this review was to discuss aspects of the physiology and function of cytoplasmic droplets, as well as to relate their presence to sperm maturation and their consequent fertility.(AU)

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The present study aimed to evaluate the mechanisms modulated by dietary arginine supplementation to sows during lactation regarding antioxidant capacity and vascularization of mammary glands. At 109 days of gestation, animals were transferred to individual farrowing crates equipped with manual feeders and automatic drinker bowls. Environmental temperature and humidity inside the farrowing rooms were registered every 15 min. At farrowing, sows were assigned in a completely randomized design to a control diet (CON) or the CON diet supplemented with 1.0% L-arginine (ARG). A total of three gilts and two sows were fed the CON diet, whereas three gilts and three sows were fed ARG diets. Sows were fed a fixed amount of 6.0 kg/day, subdivided equally in four delivery times (0700, 1000, 1300 and 1600 h) for 21 days. At weaning, sows were slaughtered and mammary tissue samples and blood from the pudendal vein were collected. Data were analyzed considering each sow as an experimental unit. Differences were considered at P<0.05. L-arginine fed sows presented lower messenger RNA (mRNA) expression for prolactin receptor (P=0.002), angiopoietin1 (P=0.03) and receptor tyrosine kinase (P=0.01); higher mRNA expression for prostaglandin synthase 1 (P=0.01); a trend of decrease for glucocorticoid receptor (P=0.06) and IGF receptor 1 (P=0.07); and a trend (P=0.05) for an increased glutathione peroxidase mRNA expression. The angiopoietin2:angiopoietin1 mRNA ratio tended to increase (P=0.07) in ARG fed sows. L-arginine fed sows had greater (P=0.04) volumetric proportion of blood vessels and a trend of enhance (P=0.07) in the number of blood vessels per mm2. These findings show that 1.0% ARG supplementation to sows activates proliferative mechanisms, may improve mammary tissues' angiogenesis and tended to increase mRNA expression of genes that encode antioxidant enzymes in mammary gland of sows.

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Avaliaram-se a proporção volumétrica dos constituintes do corpo lúteo e a distribuição de células lúteas com grânulos citoplasmáticos no corpo lúteo de animais Nelore ao longo da gestação e em animais não gestantes. Foram coletados ovários com corpos lúteos de 24 animais abatidos em frigorífico. Os animais foram distribuídos em dois grupos: gestantes e não gestantes. A idade gestacional foi determinada pela medição do comprimento apicocaudal do feto. Os ovários foram distribuídos segundo o trimestre gestacional: primeiro - gestação de até 90 dias; segundo - de 91 a 180 dias; e terceiro - de 181 a 270 dias. Os corpos lúteos, processados para inclusão em paraplast, foram avaliados em microscópio de luz. Na proporção volumétrica do corpo lúteo, os constituintes avaliados foram citoplasma e núcleo de células lúteas, tecido conjuntivo e fibroblastos, células endoteliais e pericitos e vasos sanguíneos. A proporção volumétrica de citoplasma de células lúteas reduziu de 46,1±2,8% para 37,9±3,5% e a de núcleo de células lúteas reduziu de 9,2±1,0% para 6,2±1,0%, do primeiro para o segundo trimestre. A proporção de tecido conjuntivo e fibroblastos aumentou de 20,9±5,4%, no primeiro trimestre, para 34,0±4,2%, no segundo trimestre. Grânulos citoplasmáticos foram evidenciados pelas técnicas histoquímicas xylidine ponceau e azul de bromofenol, que indicam sua provável composição proteica. A quantidade de células maiores com grânulos aumentou significativamente de 2,3±1,9%, no primeiro trimestre, para 25,5±20,3%, no segundo. A proporção volumétrica de citoplasma e núcleo de células lúteas diminuiu ao longo da gestação, e a de tecido conjuntivo aumentou. A quantidade de células lúteas maiores contendo grânulos também aumentou ao longo da gestação.(AU)

The purpose of this study was to evaluate, in cycling and pregnant Nelore cows, the volumetric proportion of the corpus luteum and the distribution of lutein cells with cytoplasmic granules. Twenty four ovaries with corpus luteum were collected in a slaughterhouse. The ovaries were distributed into two groups: pregnant and non-pregnant cows. The group of pregnant cows was divided according to the stage of pregnancy, by the crown-rump fetus length: 1st third - until 90 days, 2nd third - between 91 and 180 days and 3rd third - between 181 and 270 days. The corpus luteum were processed for inclusion in paraplast, and slides were stained for analysis in light microscopy. The constituents quantified in the volumetric proportion were: lutein cells cytoplasm and nucleus, connective tissue and fibroblasts, endothelial cells and pericyte and blood vessels. The volumetric proportion of lutein cells cytoplasm decreased significantly from 46.1±2.8% to 37.9±3.5%, and also decreased significantly in the nucleus from 9.2±1.0% to 6.2±1.0% between the first and the second trimester of pregnancy. The amount of connective tissue and fibroblasts increased significantly throughout gestation, with 20.9±5.4% on the first trimester and 34.0±4.2% on the second. Granules were evidenced by the histochemical technique of Xylidine Ponceau and Bromophenol blue, indicating their probable protein composition. The amount of lutein cells with granules increased throughout gestation, but significant difference was observed only between the first (2.3±1.9%) and second trimester (25.5±20.3%). The cytoplasmic and nucleus volumetric proportion decreased during pregnancy and the volumetric proportion of connective tissue increased. The amount of lutein cells with granules increased throughout pregnancy.(AU)

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Avaliaram-se a proporção volumétrica dos constituintes do corpo lúteo e a distribuição de células lúteas com grânulos citoplasmáticos no corpo lúteo de animais Nelore ao longo da gestação e em animais não gestantes. Foram coletados ovários com corpos lúteos de 24 animais abatidos em frigorífico. Os animais foram distribuídos em dois grupos: gestantes e não gestantes. A idade gestacional foi determinada pela medição do comprimento apicocaudal do feto. Os ovários foram distribuídos segundo o trimestre gestacional: primeiro - gestação de até 90 dias; segundo - de 91 a 180 dias; e terceiro - de 181 a 270 dias. Os corpos lúteos, processados para inclusão em paraplast, foram avaliados em microscópio de luz. Na proporção volumétrica do corpo lúteo, os constituintes avaliados foram citoplasma e núcleo de células lúteas, tecido conjuntivo e fibroblastos, células endoteliais e pericitos e vasos sanguíneos. A proporção volumétrica de citoplasma de células lúteas reduziu de 46,1±2,8% para 37,9±3,5% e a de núcleo de células lúteas reduziu de 9,2±1,0% para 6,2±1,0%, do primeiro para o segundo trimestre. A proporção de tecido conjuntivo e fibroblastos aumentou de 20,9±5,4%, no primeiro trimestre, para 34,0±4,2%, no segundo trimestre. Grânulos citoplasmáticos foram evidenciados pelas técnicas histoquímicas xylidine ponceau e azul de bromofenol, que indicam sua provável composição proteica. A quantidade de células maiores com grânulos aumentou significativamente de 2,3±1,9%, no primeiro trimestre, para 25,5±20,3%, no segundo. A proporção volumétrica de citoplasma e núcleo de células lúteas diminuiu ao longo da gestação, e a de tecido conjuntivo aumentou. A quantidade de células lúteas maiores contendo grânulos também aumentou ao longo da gestação.(AU)

The purpose of this study was to evaluate, in cycling and pregnant Nelore cows, the volumetric proportion of the corpus luteum and the distribution of lutein cells with cytoplasmic granules. Twenty four ovaries with corpus luteum were collected in a slaughterhouse. The ovaries were distributed into two groups: pregnant and non-pregnant cows. The group of pregnant cows was divided according to the stage of pregnancy, by the crown-rump fetus length: 1st third - until 90 days, 2nd third - between 91 and 180 days and 3rd third - between 181 and 270 days. The corpus luteum were processed for inclusion in paraplast, and slides were stained for analysis in light microscopy. The constituents quantified in the volumetric proportion were: lutein cells cytoplasm and nucleus, connective tissue and fibroblasts, endothelial cells and pericyte and blood vessels. The volumetric proportion of lutein cells cytoplasm decreased significantly from 46.1±2.8% to 37.9±3.5%, and also decreased significantly in the nucleus from 9.2±1.0% to 6.2±1.0% between the first and the second trimester of pregnancy. The amount of connective tissue and fibroblasts increased significantly throughout gestation, with 20.9±5.4% on the first trimester and 34.0±4.2% on the second. Granules were evidenced by the histochemical technique of Xylidine Ponceau and Bromophenol blue, indicating their probable protein composition. The amount of lutein cells with granules increased throughout gestation, but significant difference was observed only between the first (2.3±1.9%) and second trimester (25.5±20.3%). The cytoplasmic and nucleus volumetric proportion decreased during pregnancy and the volumetric proportion of connective tissue increased. The amount of lutein cells with granules increased throughout pregnancy.(AU)

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The aim of this study was to evaluate the use of low concentrations of natural and lyophilized low density lipoprotein (LDL) from hen's egg yolk for cryopreservation of canine semen. Different ammonium sulphate concentrations were tested to extract LDL from egg yolk. The yolk was centrifuged, and LDL was isolated using 10, 20, 40, 45, or 50 percent ammonium sulphate solution (ASS). The LDL-rich floating fraction was collected for chemical characterization. Dry matter content was lowest (P<0.05) in the LDL extracted with the 50 percent ASS. The purification of LDL increased in association with increasing ammonium sulphate concentrations. SDS-PAGE showed that the 50 percent ASS solution yielded a purer fraction of LDL from egg yolk. For semen cryopreservation, TRIS extender was used replacing 20 percent egg yolk (control) by natural or lyophilized LDL using 1, 2, and 3 percent (w/v). Semen was centrifuged (755Xg for 7 min), diluted with one of the extenders, packed into 0.5mL straws (100x106 sperm/mL), and placed in a programmable cryopreservation machine. Thawed semen (37°C/ 30s) was analyzed for sperm motility, morphology, and by the hypoosmotic and epifluorescence tests (CFDA/ PI). Natural LDL extracted with 50 percent ASS was as effective as whole egg yolk to preserve canine frozen sperm when using low concentrations. The lyophilized LDL, mainly in the two higher concentrations tested (2 and 3 percent), was unsuitable to maintain the effectiveness of the LDL cryoprotective effect on dog sperm.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar o uso de baixas concentrações da lipoproteína de baixa densidade (LBD) extraída da gema do ovo de galinha, nas formas natural e liofilizada, na criopreservado do sêmen canino. Diferentes concentrações de sulfato de amônio também foram testadas na extrato da LBD da gema do ovo. A gema foi centrifugada, sendo a LBD isolada usando-se soluto saturada de sulfato de amônio (SSA) nas concentrações de 10, 20, 40, 45 e 50 por cento. A frado rica em LBD foi coletada para caracterizado química. O conteœdo de matéria seca foi menor (P<0,05) na LBD extraída com SSA 50 por cento. A pureza da LBD melhorou medida que se aumentou a concentrado de SSA utilizada. SDS-PAGE mostrou que a SSA 50 por cento produziu uma frado mais pura de LBD oriunda da gema do ovo. Para o congelamento de sêmen, o meio diluidor TRIS teve a gema do ovo a 20 por cento (controle) substituída pela LBD a 1, 2 e 3 por cento (p/v), nas formas natural e liofilizada. O sêmen foi centrifugado (755xg por 7min), diluído em um dos meios diluidores em teste e envasado em palhetas de 0,5mL (100x106 sptz/mL), sendo congelado em máquina de congelamento programável. O sêmen descongelado (37°C/30s) foi analisado quanto motilidade e morfologia espermática e nos testes hiposm-tico e de epifluorescência (DACF/IP). A LBD natural extraída com SSA 50 por cento foi tão eficiente quanto a gema do ovo na preservado do espermatozoide canino congelado nas baixas concentrações testadas. A LBD liofilizada, principalmente as duas maiores concentrações (2 e 3 por cento), não foi adequada para manter o efeito crioprotetor da LBD sobre o espermatozoide canino.(AU)

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The aim of this study was to evaluate the use of low concentrations of natural and lyophilized low density lipoprotein (LDL) from hen's egg yolk for cryopreservation of canine semen. Different ammonium sulphate concentrations were tested to extract LDL from egg yolk. The yolk was centrifuged, and LDL was isolated using 10, 20, 40, 45, or 50 percent ammonium sulphate solution (ASS). The LDL-rich floating fraction was collected for chemical characterization. Dry matter content was lowest (P<0.05) in the LDL extracted with the 50 percent ASS. The purification of LDL increased in association with increasing ammonium sulphate concentrations. SDS-PAGE showed that the 50 percent ASS solution yielded a purer fraction of LDL from egg yolk. For semen cryopreservation, TRIS extender was used replacing 20 percent egg yolk (control) by natural or lyophilized LDL using 1, 2, and 3 percent (w/v). Semen was centrifuged (755Xg for 7 min), diluted with one of the extenders, packed into 0.5mL straws (100x106 sperm/mL), and placed in a programmable cryopreservation machine. Thawed semen (37°C/ 30s) was analyzed for sperm motility, morphology, and by the hypoosmotic and epifluorescence tests (CFDA/ PI). Natural LDL extracted with 50 percent ASS was as effective as whole egg yolk to preserve canine frozen sperm when using low concentrations. The lyophilized LDL, mainly in the two higher concentrations tested (2 and 3 percent), was unsuitable to maintain the effectiveness of the LDL cryoprotective effect on dog sperm...

O objetivo deste estudo foi avaliar o uso de baixas concentrações da lipoproteína de baixa densidade (LBD) extraída da gema do ovo de galinha, nas formas natural e liofilizada, na criopreservado do sêmen canino. Diferentes concentrações de sulfato de amônio também foram testadas na extrato da LBD da gema do ovo. A gema foi centrifugada, sendo a LBD isolada usando-se soluto saturada de sulfato de amônio (SSA) nas concentrações de 10, 20, 40, 45 e 50 por cento. A frado rica em LBD foi coletada para caracterizado química. O conteœdo de matéria seca foi menor (P<0,05) na LBD extraída com SSA 50 por cento. A pureza da LBD melhorou medida que se aumentou a concentrado de SSA utilizada. SDS-PAGE mostrou que a SSA 50 por cento produziu uma frado mais pura de LBD oriunda da gema do ovo. Para o congelamento de sêmen, o meio diluidor TRIS teve a gema do ovo a 20 por cento (controle) substituída pela LBD a 1, 2 e 3 por cento (p/v), nas formas natural e liofilizada. O sêmen foi centrifugado (755xg por 7min), diluído em um dos meios diluidores em teste e envasado em palhetas de 0,5mL (100x106 sptz/mL), sendo congelado em máquina de congelamento programável. O sêmen descongelado (37°C/30s) foi analisado quanto motilidade e morfologia espermática e nos testes hiposm-tico e de epifluorescência (DACF/IP). A LBD natural extraída com SSA 50 por cento foi tão eficiente quanto a gema do ovo na preservado do espermatozoide canino congelado nas baixas concentrações testadas. A LBD liofilizada, principalmente as duas maiores concentrações (2 e 3 por cento), não foi adequada para manter o efeito crioprotetor da LBD sobre o espermatozoide canino...

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As lipoproteínas de baixa densidade são consideradas as principais responsáveis pelo papel protetor da gema do ovo de galinha na criopreservação de espermatozoides em mamíferos. A extração dessas lipoproteínas éum método fácil, rápido e eficiente, porém é importante enfatizar seus pontos críticos, a fim de se evitarem falhas durante o processo e uma possível contaminação da fração lipoproteica. Vários experimentos têm testado o uso de lipoproteínas de baixa densidade adicionadas aos meios diluidores em substituição à gema do ovo total. Os resultados mostram que meios contendo as lipoproteínas de baixa densidade são capazes de preservar parâmetrosespermáticos como motilidade, integridade estrutural e funcional das membranas e fertilidade. O objetivo desta revisão é discutir os pontos críticos da metodologia de extração das lipoproteínas de baixa densidade, bem como aspesquisas existentes sobre o uso de meios diluidores contendo essas lipoproteínas no congelamento de sêmen.

Low density lipoproteins (LDL) are considered largely responsible for the protective action of hen’s egg yolk in cryopreservation of mammalian spermatozoa. The LDL extraction is an easy, fast, and efficient method, but it is important to emphasize its critical points, in order to prevent failures during the process and possible contamination of purified LDL fraction. Many studies have been evaluating the use of LDL added in seminal extenders replacing whole egg yolk. Results have shown that LDL extenders are capable to preserve spermatic parameters such as motility, structural and functional membranes integrity, and fertility. The aim of this review is to discuss critical steps of the extraction methodology of low density lipoproteins, as well as researches developed for testing its use in frozen-thawed semen.

Asunto(s)

RESUMEN

As lipoproteínas de baixa densidade são consideradas as principais responsáveis pelo papel protetor da gema do ovo de galinha na criopreservação de espermatozoides em mamíferos. A extração dessas lipoproteínas éum método fácil, rápido e eficiente, porém é importante enfatizar seus pontos críticos, a fim de se evitarem falhas durante o processo e uma possível contaminação da fração lipoproteica. Vários experimentos têm testado o uso de lipoproteínas de baixa densidade adicionadas aos meios diluidores em substituição à gema do ovo total. Os resultados mostram que meios contendo as lipoproteínas de baixa densidade são capazes de preservar parâmetrosespermáticos como motilidade, integridade estrutural e funcional das membranas e fertilidade. O objetivo desta revisão é discutir os pontos críticos da metodologia de extração das lipoproteínas de baixa densidade, bem como aspesquisas existentes sobre o uso de meios diluidores contendo essas lipoproteínas no congelamento de sêmen.(AU)

Low density lipoproteins (LDL) are considered largely responsible for the protective action of hens egg yolk in cryopreservation of mammalian spermatozoa. The LDL extraction is an easy, fast, and efficient method, but it is important to emphasize its critical points, in order to prevent failures during the process and possible contamination of purified LDL fraction. Many studies have been evaluating the use of LDL added in seminal extenders replacing whole egg yolk. Results have shown that LDL extenders are capable to preserve spermatic parameters such as motility, structural and functional membranes integrity, and fertility. The aim of this review is to discuss critical steps of the extraction methodology of low density lipoproteins, as well as researches developed for testing its use in frozen-thawed semen. (AU)

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Objetivou-se avaliar o efeito da geleia real na qualidade seminal e na morfometria testicular de coelhos. Quatorze coelhos adultos da raça Nova Zelândia foram distribuídos em três grupos: com administração diária de 1mL de água, via oral (SG); administração diária de 0,5mg (0,5G) de geleia real diluída em 1mL de água, via oral; e administração diária de 1,0mL (1,0G) de geleia real diluída em 1mL de água, via oral. O fornecimento de geleia real foi iniciado 30 dias antes das coletas de sêmen, permanecendo durante todo o período de coleta, totalizando 90 dias. Utilizou-se o método da vagina artificial para coleta de sêmen. Foram avaliados os parâmetros físicos e morfológicos do sêmen e os parâmetros de morfometria testicular. Houve diferença no volume seminal do 0,5G (0,54±0,22) em relação ao SG (0,39±0,13) e ao 1,0G (0,30±0,09) (P<0,05). Para os grupos SG, 0,5G e 1,0G, não houve diferença (P>0,05) para turbilhonamento espermático, concentração espermática, motilidade progressiva e vigor espermático. Os defeitos maiores no grupo 0,5G (8,52±3,26) foram menores do que nos grupos SG (14,09±4,26) e 1,0G (16,1±3,95) (P<0,05). Não houve diferença entre os defeitos menores e os defeitos totais (P>0,05). Os pesos corporal, testicular, epididimário e o índice gonadossomático não diferiram entre os grupos (P>0,05). A ingestão diária de 0,5mg de geleia real apresentou efeitos positivos na morfologia espermática de coelhos.

A trial was carried out to evaluate the effects of royal jelly on the seminal quality and testicular morphometry of rabbits. Fourteen mature rabbits of New Zealand breed were distributed between three groups. The first group was supplied with 1mL of water only (SG), the second group was supplied with 0.5mg of royal jelly diluted in 1mL of water (0.5G), and the third group was supplied with 1mg of royal jelly also diluted in 1mL of water (1.0G). The royal jelly supply started 30 days before semen collection and lasted the entire experimental period. An artificial vagina was used to collect the rabbits' semen. Physical and morphological parameters in the semen and the testicular morphometry were evaluated. Differences were found on the seminal volume in group 0.5G(0,54±0,22) in relation to SG (0,39±0,13) and 1.0G (0,30±0,09) groups (P<0.05). For SG, 0.5G and 1.0G groups, no differences (P>0.05) were found in sperm concentration, gross motility, individual motility and vigor. The total of primary defects in group 0.5G (8,52±3,26) was lower than in groups SG (14,09±4,2) and 1.0G (16,1±3,95) (P<0.05). No significant difference was found between secondary defects and the total defects on the semen (P>0.05). Body, testicular and epididymal weights did not differ between groups, as well to the gonadosomatic index (P>0.05). The ingestion of royal jelly produced positive results on the seminal production of males.

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Estudaram-se os efeitos da geleia real sobre a espermatogênese de coelhos tratados com diferentes concentrações de geleia real. Os tratamentos foram formados por três grupos: grupo-controle; grupo que recebeu 0,5mg/dia de geleia real; e grupo que recebeu 1,0mg/dia de geleia real. O estudo envolveu a morfometria testicular. Não houve diferença entre os tratamentos quanto aos pesos corporal (T1=3,20±0,19kg, T2=2,96±0,30kg e T3=3,21±0,37kg) e gonadal (T1=2,36±0,33g, T2=2,53±0,33g e T3=2,64±0,39g) e quanto aos índices gonadossomático (T1=0,15±0,02%, T2=0,17±0,03% e T3=0,16±0,02%) e tubulossomático (T1=0,06±0,01%; T2=0,07±0,01% e T3=0,06±0,01%). O diâmetro médio dos túbulos seminíferos (T1=225,95±13,27µm, T2=239,68±21,50µm e T3=231,57±15,94µm), a altura do epitélio seminífero (T1=66,05±5,37µm, T2= 73,47±9,11µm e T3=63,34±4,79µm) e o comprimento de túbulos seminíferos por testículo (T1=46,63±13,44m, T2=43,58±12,17m e T3=46,96±9,54m) e por grama de testículo (T1=19,50±2,68m, T2=17,12±3,91m e T3=17,78±1,98m) não diferiram entre tratamentos. Conclui-se que a suplementação com geleia real, nas doses utilizadas, não altera as características testiculares avaliadas.

This study aimed to investigate the effects of royal jelly on spermatogenesis in rabbits treated with different concentrations of RJ (Control; 0,5mg/day; and 1,0mg/day) using testicular morphometry. There was no significant difference between the body weight (T1= 3.20±0.19kg; T2= 2.96±0.30kg; T3=3.21±0.37kg) and gonadal weight (T1= 2.36±0.33g; T2= 2.53±0.33g; T3= 2.64±0.39g), gonadossomatic index (T1= 0.15±0.02%; T2= 0.17±0.03%. T3= 0.16±0.02%) and tubulossomatic index (T1= 0.06±0.01%; T2= 0.07±0.01%. T3= 0.06±0.01%) between treatments, showing that the percentage of body mass, and the percentage of seminiferous tubules allocated in testis were similar in the 3 experimental groups. Similarly, the mean diameter of the seminiferous tubules (T1= 225.95±13.27µm; T2=239.68±21.50µm; T3= 231.57±15,94µm), the height of the seminiferous epithelium (T1=66,05±5,37µm; T2=73.47±9.11µm; T3=63.34±4.79 µm) and length of seminiferous tubule for testis (T1=46.63±13.44m; T2=43.58±12.17m; T3=46.96±9.54m) and per gram of testis (T1=19.50±2.68m; T2=17.12±3.91m; T3=17.78±1.98m) did not differ statistically. It was concluded that supplementation with royal jelly, at the doses used, did not alter the testicular parameters evaluated here.

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Desde 1939, a gema do ovo tem sido utilizada na biotecnologia da reprodução como ingrediente essencial nos meios diluidores para resfriamento e congelamento de espermatozoides em várias espécies domésticas. A gema é formada por lipoproteínas, livetinas e fosvitinas, encontradas em duas frações facilmente separáveis pelo método de centrifugação: o grânulo e o plasma. Acredita-se que as lipoproteínas de baixa densidade, presentes no plasma, sejam as responsáveis por sua ação crioprotetora. Esta revisão enfoca a composição química do ovo de galinha e de sua gema, mostrando, cronologicamente, como foram desenvolvidas as hipóteses existentes sobre seu mecanismo de ação no congelamento de sêmen.

Since 1939, the hen’s egg yolk has been used as an essential ingredient in extenders for cooling and freezing sperm of several domestic species, in reproductive biotechnology protocols. The egg yolk is composed of lipoproteins, livetins, and lipovitins. These components can be easily separated by centrifugation in the granular and the plasmatic fractions. It has been acknowledged that the low density lipoproteins present in the plasma are responsible for the protective effects of the egg yolk. This review focuses on the chemical compound of the egg yolk and historical aspects of the hypotheses that try to explain the mechanism of action of the egg yolk on sperm cryopreservation.

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RESUMEN

Estudaram-se os efeitos da geleia real sobre a espermatogênese de coelhos tratados com diferentes concentrações de geleia real. Os tratamentos foram formados por três grupos: grupo-controle; grupo que recebeu 0,5mg/dia de geleia real; e grupo que recebeu 1,0mg/dia de geleia real. O estudo envolveu a morfometria testicular. Não houve diferença entre os tratamentos quanto aos pesos corporal (T1=3,20±0,19kg, T2=2,96±0,30kg e T3=3,21±0,37kg) e gonadal (T1=2,36±0,33g, T2=2,53±0,33g e T3=2,64±0,39g) e quanto aos índices gonadossomático (T1=0,15±0,02%, T2=0,17±0,03% e T3=0,16±0,02%) e tubulossomático (T1=0,06±0,01%; T2=0,07±0,01% e T3=0,06±0,01%). O diâmetro médio dos túbulos seminíferos (T1=225,95±13,27µm, T2=239,68±21,50µm e T3=231,57±15,94µm), a altura do epitélio seminífero (T1=66,05±5,37µm, T2= 73,47±9,11µm e T3=63,34±4,79µm) e o comprimento de túbulos seminíferos por testículo (T1=46,63±13,44m, T2=43,58±12,17m e T3=46,96±9,54m) e por grama de testículo (T1=19,50±2,68m, T2=17,12±3,91m e T3=17,78±1,98m) não diferiram entre tratamentos. Conclui-se que a suplementação com geleia real, nas doses utilizadas, não altera as características testiculares avaliadas.(AU)

This study aimed to investigate the effects of royal jelly on spermatogenesis in rabbits treated with different concentrations of RJ (Control; 0,5mg/day; and 1,0mg/day) using testicular morphometry. There was no significant difference between the body weight (T1= 3.20±0.19kg; T2= 2.96±0.30kg; T3=3.21±0.37kg) and gonadal weight (T1= 2.36±0.33g; T2= 2.53±0.33g; T3= 2.64±0.39g), gonadossomatic index (T1= 0.15±0.02%; T2= 0.17±0.03%. T3= 0.16±0.02%) and tubulossomatic index (T1= 0.06±0.01%; T2= 0.07±0.01%. T3= 0.06±0.01%) between treatments, showing that the percentage of body mass, and the percentage of seminiferous tubules allocated in testis were similar in the 3 experimental groups. Similarly, the mean diameter of the seminiferous tubules (T1= 225.95±13.27µm; T2=239.68±21.50µm; T3= 231.57±15,94µm), the height of the seminiferous epithelium (T1=66,05±5,37µm; T2=73.47±9.11µm; T3=63.34±4.79 µm) and length of seminiferous tubule for testis (T1=46.63±13.44m; T2=43.58±12.17m; T3=46.96±9.54m) and per gram of testis (T1=19.50±2.68m; T2=17.12±3.91m; T3=17.78±1.98m) did not differ statistically. It was concluded that supplementation with royal jelly, at the doses used, did not alter the testicular parameters evaluated here.(AU)

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Objetivou-se avaliar o efeito da geleia real na qualidade seminal e na morfometria testicular de coelhos. Quatorze coelhos adultos da raça Nova Zelândia foram distribuídos em três grupos: com administração diária de 1mL de água, via oral (SG); administração diária de 0,5mg (0,5G) de geleia real diluída em 1mL de água, via oral; e administração diária de 1,0mL (1,0G) de geleia real diluída em 1mL de água, via oral. O fornecimento de geleia real foi iniciado 30 dias antes das coletas de sêmen, permanecendo durante todo o período de coleta, totalizando 90 dias. Utilizou-se o método da vagina artificial para coleta de sêmen. Foram avaliados os parâmetros físicos e morfológicos do sêmen e os parâmetros de morfometria testicular. Houve diferença no volume seminal do 0,5G (0,54±0,22) em relação ao SG (0,39±0,13) e ao 1,0G (0,30±0,09) (P<0,05). Para os grupos SG, 0,5G e 1,0G, não houve diferença (P>0,05) para turbilhonamento espermático, concentração espermática, motilidade progressiva e vigor espermático. Os defeitos maiores no grupo 0,5G (8,52±3,26) foram menores do que nos grupos SG (14,09±4,26) e 1,0G (16,1±3,95) (P<0,05). Não houve diferença entre os defeitos menores e os defeitos totais (P>0,05). Os pesos corporal, testicular, epididimário e o índice gonadossomático não diferiram entre os grupos (P>0,05). A ingestão diária de 0,5mg de geleia real apresentou efeitos positivos na morfologia espermática de coelhos.(AU)

A trial was carried out to evaluate the effects of royal jelly on the seminal quality and testicular morphometry of rabbits. Fourteen mature rabbits of New Zealand breed were distributed between three groups. The first group was supplied with 1mL of water only (SG), the second group was supplied with 0.5mg of royal jelly diluted in 1mL of water (0.5G), and the third group was supplied with 1mg of royal jelly also diluted in 1mL of water (1.0G). The royal jelly supply started 30 days before semen collection and lasted the entire experimental period. An artificial vagina was used to collect the rabbits' semen. Physical and morphological parameters in the semen and the testicular morphometry were evaluated. Differences were found on the seminal volume in group 0.5G(0,54±0,22) in relation to SG (0,39±0,13) and 1.0G (0,30±0,09) groups (P<0.05). For SG, 0.5G and 1.0G groups, no differences (P>0.05) were found in sperm concentration, gross motility, individual motility and vigor. The total of primary defects in group 0.5G (8,52±3,26) was lower than in groups SG (14,09±4,2) and 1.0G (16,1±3,95) (P<0.05). No significant difference was found between secondary defects and the total defects on the semen (P>0.05). Body, testicular and epididymal weights did not differ between groups, as well to the gonadosomatic index (P>0.05). The ingestion of royal jelly produced positive results on the seminal production of males.(AU)

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Desde 1939, a gema do ovo tem sido utilizada na biotecnologia da reprodução como ingrediente essencial nos meios diluidores para resfriamento e congelamento de espermatozoides em várias espécies domésticas. A gema é formada por lipoproteínas, livetinas e fosvitinas, encontradas em duas frações facilmente separáveis pelo método de centrifugação: o grânulo e o plasma. Acredita-se que as lipoproteínas de baixa densidade, presentes no plasma, sejam as responsáveis por sua ação crioprotetora. Esta revisão enfoca a composição química do ovo de galinha e de sua gema, mostrando, cronologicamente, como foram desenvolvidas as hipóteses existentes sobre seu mecanismo de ação no congelamento de sêmen.(AU)

Since 1939, the hens egg yolk has been used as an essential ingredient in extenders for cooling and freezing sperm of several domestic species, in reproductive biotechnology protocols. The egg yolk is composed of lipoproteins, livetins, and lipovitins. These components can be easily separated by centrifugation in the granular and the plasmatic fractions. It has been acknowledged that the low density lipoproteins present in the plasma are responsible for the protective effects of the egg yolk. This review focuses on the chemical compound of the egg yolk and historical aspects of the hypotheses that try to explain the mechanism of action of the egg yolk on sperm cryopreservation. (AU)

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The objective was to evaluate the suitability of using natural or lyophilized low density lipoproteins (LDL), in lieu of whole egg yolk, in extenders for cryopreserving ram semen. Once extragonadal sperm reserves were depleted in 10 fertile Santa Inês cross rams, two ejaculates per ram were collected for cryopreservation. Nine extenders were used: Tris-16% egg yolk extender with 5% glycerol as a control (T1), and substitution of whole egg yolk with 8, 12, 16 or 20% natural LDL (T2-T5, respectively), or with 8, 12, 16, or 20% lyophilized LDL (T6-T9). Semen was diluted to 100 × 10(6) sperm/mL, packaged into 0.25 mL straws, cooled, held at 5 °C for 3 h, and then frozen in liquid nitrogen vapor. Immediately after thawing (37 °C for 30 s), sperm total and progressive motility, and kinetic parameters were analyzed with computer assisted semen analysis (CASA). Percentage of sperm with plasma membrane functional integrity was assessed by the hypoosmotic swelling test (HOST), sperm membrane physical integrity with propidium iodide (PI), and acrosome integrity with FITC-PSA using an epifluorescent microscope. For all sperm end points, there was no difference between the control and natural LDL treatments (P > 0.05): total motility (T1: 20.9 ± 11.9 and average of T2-T5: 25.9 ± 13.6%; mean ± SD), progressive motility (T1: 6.6 ± 4.2 and average of T2-T5: 11.7 ± 7.5%), HOST(+) (T1: 23.7 ± 6.9 and average of T2-T5: 23.2 ± 8.7 %) and PI(-)/PSA(-) (T1: 13.8 ± 7.8 and average of T2-T5: 18.1 ± 7.8%). However, lyophilization was apparently unable to preserve the protective function of LDL; every sperm end point was significantly worse than in the control and natural LDL groups. We concluded that natural LDL was appropriate for cryopreserving ram semen, as it yielded results similar to those obtained with whole egg yolk.

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The aim of this study was to evaluate the distribution of frozen-thawed spermatozoa within the uterine lumen and oviducts following intrauterine laparoscopic deposition at two sites. Twelve bitches of unknown reproductive history were randomly distributed into two groups. Semen (3 ml containing 300 × 10(6) frozen-thawed spermatozoa) was infused at the uterine body (UB group) or at the cranial tip of the left uterine horn. A 22-G catheter was used to access the uterine lumen. Sperm cell distribution was evaluated after ovariohysterectomy performed 3 h after artificial insemination (AI). There was no difference between groups in mean time to perform AI. Spermatozoa were detected in all uterine segments, including the tip of both horns, but none was detected in the oviduct. The 22-G catheter facilitated deposition of semen in the uterine lumen, particularly at the UB site. Sperm cell distribution occurred evenly along both horns, independent of the site of semen deposition.

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Avaliaram-se os efeitos da geleia real sobre os parâmetros morfofisiológicos testiculares de camundongos (Mus musculus). Utilizaram-se 57 machos Swiss, com quatro meses de idade, distribuídos aleatoriamente em seis tratamentos: T1: solução fisiológica, via intraperitoneal; T2: 0,1mg de geleia real, via intraperitoneal; T3: 0,2mg de geleia real, via intraperitoneal; T4: água destilada, via oral; T5: 0,1mg de geleia real, via oral; e T6: 0,2mg de geleia real, via oral. Após 45 dias de suplementação com geleia real, os animais sacrificados e pesados tiveram seus testículos coletados, incluídos em parafina e corados com hematoxilina/eosina. Não houve diferença entre os tratamentos quanto aos: pesos corporal e testicular, índice gonadossomático, diâmetro tubular, altura do epitélio, comprimento total dos túbulos seminíferos, comprimento tubular por grama de testículo, índices tubulossomático e leydigossomático e valores de proporção volumétrica referentes à túnica própria, epitélio seminífero, vaso sanguíneo e vaso linfático. Foi encontrada diferença entre T1 e T3 em relação aos túbulos seminíferos e ao espaço intertubular.

The effects of royal jelly on the morphophysiological parameters of mice (Mus musculus) testicles were studied. Fifty-eight male Swiss mice were evaluated. They were four-month old and were randomly distributed in six treatments: T1: physiological solution, intraperitonial route; T2: 0.1mg of royal jelly, intraperitonial route; T3: 0.2mg of royal jelly, intraperitonial route; T4: distilled water, orally; T5: 0.1mg of royal jelly, orally; and T6: 0.2mg of royal jelly, orally. After 45 days of supplementation with royal jelly, the animals were weighted, slaughtered, and the testicles collected, included in paraffin, and stained with haematoxylin-eosin. No differences among treatments were observed for: body and testicular weights, gonadossomatic index, tubular diameter, epithelial height, total length of seminiferous tubules, tubular length per testicle gram, tubulossomatic and leydigossomatic indexes and the value of volumetric proportion related to tunic, seminiferous epithelium, blood vessel, and lymphatic vessel. Differences between T1 and T3 about the seminiferous tubules and intertubular space were found.

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Avaliaram-se os efeitos da geleia real sobre os parâmetros morfofisiológicos testiculares de camundongos (Mus musculus). Utilizaram-se 57 machos Swiss, com quatro meses de idade, distribuídos aleatoriamente em seis tratamentos: T1: solução fisiológica, via intraperitoneal; T2: 0,1mg de geleia real, via intraperitoneal; T3: 0,2mg de geleia real, via intraperitoneal; T4: água destilada, via oral; T5: 0,1mg de geleia real, via oral; e T6: 0,2mg de geleia real, via oral. Após 45 dias de suplementação com geleia real, os animais sacrificados e pesados tiveram seus testículos coletados, incluídos em parafina e corados com hematoxilina/eosina. Não houve diferença entre os tratamentos quanto aos: pesos corporal e testicular, índice gonadossomático, diâmetro tubular, altura do epitélio, comprimento total dos túbulos seminíferos, comprimento tubular por grama de testículo, índices tubulossomático e leydigossomático e valores de proporção volumétrica referentes à túnica própria, epitélio seminífero, vaso sanguíneo e vaso linfático. Foi encontrada diferença entre T1 e T3 em relação aos túbulos seminíferos e ao espaço intertubular.(AU)

The effects of royal jelly on the morphophysiological parameters of mice (Mus musculus) testicles were studied. Fifty-eight male Swiss mice were evaluated. They were four-month old and were randomly distributed in six treatments: T1: physiological solution, intraperitonial route; T2: 0.1mg of royal jelly, intraperitonial route; T3: 0.2mg of royal jelly, intraperitonial route; T4: distilled water, orally; T5: 0.1mg of royal jelly, orally; and T6: 0.2mg of royal jelly, orally. After 45 days of supplementation with royal jelly, the animals were weighted, slaughtered, and the testicles collected, included in paraffin, and stained with haematoxylin-eosin. No differences among treatments were observed for: body and testicular weights, gonadossomatic index, tubular diameter, epithelial height, total length of seminiferous tubules, tubular length per testicle gram, tubulossomatic and leydigossomatic indexes and the value of volumetric proportion related to tunic, seminiferous epithelium, blood vessel, and lymphatic vessel. Differences between T1 and T3 about the seminiferous tubules and intertubular space were found.(AU)

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The preservation of chinchilla genital organs using a fixed solution of paraformaldehyde 10 percent buffered and a saturated solution of Bouin during 4, 12 and 18 hours of fixation, inclusion in paraffin and staining with hematoxylin-eosin was evaluated. The Bouin solution with 12 hours of fixation was the best protocol of fixation for the ovaries, oviduct, uterus and vagina, resulting in little tissue retraction and better cellular integration when compared to the other fixing times (4 and 18 hours). The fixation with paraformaldehyde showed good results of tissues fixation. Chinchilla genital organs can be preserved with paraformaldehyde 10 percent buffered and Bouin solution using 12 hours of fixation.

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