RESUMEN
Cystic fibrosis (CF) is a frequent and lethal autosomal recessive disease. It results from different possible mutations in the CFTR gene, which encodes the CFTR chloride channel. We have previously studied the differential expression of genes in CF and CF corrected cell lines, and found a reduced expression of MTND4 in CF cells. MTND4 is a mitochondrial gene encoding the MTND4 subunit of the mitochondrial Complex I (mCx-I). Since this subunit is essential for the assembly and activity of mCx-I, we have now studied whether the activity of this complex was also affected in CF cells. By using Blue Native-PAGE, the in-gel activity (IGA) of the mCx-I was found reduced in CFDE and IB3-1 cells (CF cell lines) compared with CFDE/6RepCFTR and S9 cells, respectively (CFDE and IB3-1 cells ectopically expressing wild-type CFTR). Moreover, colon carcinoma T84 and Caco-2 cells, which express wt-CFTR, either treated with CFTR inhibitors (glibenclamide, CFTR(inh)-172 or GlyH101) or transfected with a CFTR-specific shRNAi, showed a significant reduction on the IGA of mCx-I. The reduction of the mCx-I activity caused by CFTR inhibition under physiological or pathological conditions may have a profound impact on mitochondrial functions of CF and non-CF cells.
Asunto(s)
Regulador de Conductancia de Transmembrana de Fibrosis Quística/metabolismo , Fibrosis Quística/enzimología , Fibrosis Quística/patología , Complejo I de Transporte de Electrón/metabolismo , Mitocondrias/metabolismo , NADH Deshidrogenasa/metabolismo , Animales , Bovinos , Línea Celular , Técnicas de Silenciamiento del Gen , Humanos , Modelos Biológicos , Interferencia de ARN , ARN Interferente Pequeño/metabolismoRESUMEN
Cystic fibrosis (CF) is a frequent autosomal recessive disease caused by mutations that impair the CF transmembrane conductance regulator (CFTR) protein function. CFTR is a chloride channel activated by cyclic AMP (cAMP) via protein kinase A (PKA) and ATP hydrolysis. We describe here a method to measure CFTR activity in a monolayer of cultured cells using a fluorescence spectrophotometer and the chloride-sensitive probe 6-methoxy-N-(3-sulfopropyl)quinolinium (SPQ). Modifying a slice holder, the spectrophotometer quartz cuvette was converted in a perfusion chamber, allowing measurement of CFTR activity in real time, in a monolayer of T84 colon carcinoma cells. The SPQ Stern-Volmer constant (K(Cl(-))) for chloride in water solution was 115.0 ± 2.8M(-1), whereas the intracellular (K(Cl(-))) was 17.8 ± 0.8 M(-1), for T84 cells. A functional analysis was performed by measuring CFTR activity in T84 cells. The CFTR transport inhibitors CFTR(inh)-172 (5 µM) and glibenclamide (100 µM) showed a significant reduction (P<0.05) in CFTR activity. This simple method allows measuring CFTR activity in a very simple, reproducible, and sensitive way.
Asunto(s)
Regulador de Conductancia de Transmembrana de Fibrosis Quística/análisis , Fibrosis Quística/patología , Espectrometría de Fluorescencia/métodos , Células Cultivadas , Canales de Cloruro/antagonistas & inhibidores , Canales de Cloruro/metabolismo , Fibrosis Quística/metabolismo , Regulador de Conductancia de Transmembrana de Fibrosis Quística/metabolismo , Gliburida/farmacología , Humanos , Hipoglucemiantes/farmacología , Cuarzo , Compuestos de Quinolinio/química , Reproducibilidad de los Resultados , Sensibilidad y EspecificidadRESUMEN
INTRODUCTION: Human milk is an essential food for newborns and affects life in the long or short terms. Its composition is modified by nutritional status and maternal diet as well as by gestational age of the newborn. It provides human milk-fed infants with the medium-chain fatty acids which are a source of energy, and essential fatty acids and their metabolic derivatives which have been involved in the neural maturation. OBJECTIVES: Due to the fact that there is little local data concerning the fatty acid composition in human milk of pre-term and full-term newborns, the present study was carried out in women living in the urban area of the Buenos Aires Province. MATERIALS AND METHODS: Samples were provided by the Bank of Human Milk, H.I.G.A. San Martín Hospital. They corresponded to mothers who had delivered preterm infants (28-36 weeks of gestational age) or full-term infants (37-42 weeks of gestational ages). Total lipids were extracted, and the fatty acid composition was determined by gas-liquid chromatography. RESULTS: Results showed increases in saturated fatty acids up to 14 carbon atoms and in polyunsaturated fatty acids in mothers of preterm newborns compared with those of full-term newborns. CONCLUSIONS: It can be concluded that gestational age affects human milk fatty acid composition. This food is essential for pre-term newborns as it is the source of energetic compounds (saturated fatty acids) as well as plastic compounds, (polyunsaturated fatty acids) which are essential for the synthesis of structural lipids and neural development.
Asunto(s)
Ácidos Grasos/análisis , Recien Nacido Prematuro , Leche Humana/química , Nacimiento a Término , Femenino , Humanos , Recién Nacido , MadresRESUMEN
Introducción. La leche materna es un alimento esencial para el recién nacido e influye en su calidad de vida en el corto y largo plazo. Su composición se modifica con el estado nutricional,la dieta materna y la edad gestacional del recién nacido. Entre otros nutrientes fundamentales provee a los lactantes de ácidos grasos de cadena media de fácil utilización, y de ácidos grasosesenciales y sus derivados metabólicos, en especial ácidos araquidónico y docosahexaenoico, que han sido involucrados en la maduración neural.Objetivos. Dada la escasez de datos locales se consideró la importancia de estudiar la composición en ácidos grasos de la leche de madres de reciénnacidos de pretérmino y de término en mujeres del área urbana de la Provincia de Buenos Aires.Material y métodos. Las muestras fueron obtenidas del Banco de Leche Materna H.I.G.A San Martín. Se extrajeron los lípidos totales y se determinó la composición en ácidos grasos porcromatografía de gas-líquido.Resultados. Los resultados muestran aumentos en ácidos grasos saturados de hasta 14 átomos de carbono y en los ácidos grasos poliinsaturadosen la leche de madres de recién nacidos de pretérmino con respecto a la de madres de recién nacidos de término.Conclusiones. La edad gestacional influye en la composición de los ácidos grasos de la leche materna, siendo la leche de madres de lactantesprematuros una fuente imprescindible de elementos energéticos (ácidos grasos saturados) y de elementos plásticos (ácidos grasos poliinsaturados)fundamentales para la síntesis de lípidosestructurales y en el desarrollo neural.(AU)
Asunto(s)
Recién Nacido , Lactante , Recien Nacido Prematuro/crecimiento & desarrollo , Leche Humana , Lactancia Materna , Nacimiento a Término , Ácidos Grasos/análisis , Ácidos Grasos/biosíntesis , Interpretación Estadística de DatosRESUMEN
Introducción. La leche materna es un alimento esencial para el recién nacido e influye en su calidad de vida en el corto y largo plazo. Su composición se modifica con el estado nutricional,la dieta materna y la edad gestacional del recién nacido. Entre otros nutrientes fundamentales provee a los lactantes de ácidos grasos de cadena media de fácil utilización, y de ácidos grasosesenciales y sus derivados metabólicos, en especial ácidos araquidónico y docosahexaenoico, que han sido involucrados en la maduración neural.Objetivos. Dada la escasez de datos locales se consideró la importancia de estudiar la composición en ácidos grasos de la leche de madres de reciénnacidos de pretérmino y de término en mujeres del área urbana de la Provincia de Buenos Aires.Material y métodos. Las muestras fueron obtenidas del Banco de Leche Materna H.I.G.A San Martín. Se extrajeron los lípidos totales y se determinó la composición en ácidos grasos porcromatografía de gas-líquido.Resultados. Los resultados muestran aumentos en ácidos grasos saturados de hasta 14 átomos de carbono y en los ácidos grasos poliinsaturadosen la leche de madres de recién nacidos de pretérmino con respecto a la de madres de recién nacidos de término.Conclusiones. La edad gestacional influye en la composición de los ácidos grasos de la leche materna, siendo la leche de madres de lactantesprematuros una fuente imprescindible de elementos energéticos (ácidos grasos saturados) y de elementos plásticos (ácidos grasos poliinsaturados)fundamentales para la síntesis de lípidosestructurales y en el desarrollo neural.
Asunto(s)
Recién Nacido , Lactante , Ácidos Grasos/análisis , Ácidos Grasos/biosíntesis , Lactancia Materna , Leche Humana , Recien Nacido Prematuro/crecimiento & desarrollo , Interpretación Estadística de Datos , Nacimiento a TérminoRESUMEN
Cystic fibrosis (CF) is an autosomic recessive disease caused by mutations in the CFTR chloride channel, which indirectly affect the expression of a net of genes. Here we describe a new CFTR-dependent gene, CISD1, encoding for the first member of a family of proteins possessing a CDGSH signature. CISD1 mRNA is down-regulated in cystic fibrosis cells, and restored in the same cells ectopically expressing wt-CFTR (CFDE and CFDE/6RepCFTR; IB3-1 and S9 cells). Inhibition of CFTR chloride transport activity by using glibenclamide (50muM, 24h) or CFTR(inh)-172 (5muM, 24h), resulted in the down-regulation of CISD1 mRNA, and CFTR stimulation with cAMP/isoproterenol/IBMX upregulated its expression. As predicted by PSORT II, a CISD1-GFP chimera was found to be located into mitochondria, suggesting a possible role in the function/regulation of mitochondrial activity, in agreement with earlier observations of a possible mitochondrial failure in cystic fibrosis.
Asunto(s)
Regulador de Conductancia de Transmembrana de Fibrosis Quística/metabolismo , Células Epiteliales/metabolismo , Proteínas Mitocondriales/genética , Células Cultivadas , Regulador de Conductancia de Transmembrana de Fibrosis Quística/genética , Humanos , Proteínas Mitocondriales/metabolismo , Regiones Promotoras Genéticas/genética , Regulación hacia ArribaRESUMEN
This article describes results obtained when human liver cells obtained from reduced grafts are cultured in a chemically defined medium. Remnants of livers after reduction for pediatric transplantation were processed by a multiple cannulation system through the existing vasculature, which allowed the homogeneous perfusion of collagenase. The graft weight ranged between 55 and 1000 g (median value: 145.6 g). The yield ranged between 0.13 x 10(6) and 38 x 10(6) cells/g of tissue (median value 14.73 x 10(6) cells/g), and the viability was 61.17 +/- 27.43%. The total number of cells ranged between 57.6 x 10(6) and 12 150 x 10(6) cells (median value: 740 x 10(6) cells). Cells were cultured for 30 days. Albumin synthesis was observed during the first 2 weeks, with a peak value at day 6 (27.85 +/- 1.77 micro g/mL). Urea production was detected during the first week (peak value at day 6: 17.12 +/- 2.11 mg/dL). Light microscopy showed the presence of cells in a monolayer. Biliary pigments were observed at day 20. By immunohistochemistry, positive cells for albumin, for hepatocyte marker, cytokeratin 19, CD 34, CD 68, and for alpha actin for smooth muscle, were observed. Our results showed that hepatocytes obtained from reduced liver grafts are easily cultured and are able to maintain viability and functionality in vitro. This alternative source of human cells maintained under controlled culture conditions may play an important role in the development of a bioartificial liver.
Asunto(s)
Hepatocitos/metabolismo , Trasplante de Hígado , Hígado Artificial , Albúminas/metabolismo , Supervivencia Celular , Células Cultivadas , Humanos , Inmunohistoquímica , Nefelometría y Turbidimetría , Urea/metabolismoRESUMEN
The aim of the present study was to measure delta9-, delta6-, and delta5-desaturase activities in liver microsomes, as well as phospholipid FA composition of liver and erythrocytes in monkeys fed a control or low-protein diet during the postweaning period. Ten Saimiri sciureus boliviensis (Cebidae) of both sexes were employed; at 12 mon of age they were separated into two groups fed ad libitum on a control or a low-protein diet for 24 mon. Saimiri sciureus had active delta9, delta6, and delta5 liver desaturase enzymes, and these activities were influenced by the diet. A low-protein diet produced a significant reduction in delta5-desaturation capacity, an increase in delta9-desaturase activity, and no change in delta6-desaturase activity (P < 0.05). These changes, evoked by protein deprivation, were reflected in the liver phospholipid FA composition. Increases in the proportion of saturated FA and in monounsaturated oleic acid (18:1n-9) and a decrease in the proportion of PUFA of the n-6 and n-3 series were produced in the animals fed a low-protein diet (P < 0.0001).
Asunto(s)
Dieta con Restricción de Proteínas , Ácido Graso Desaturasas/metabolismo , Ácidos Grasos/análisis , Hígado/enzimología , Animales , Peso Corporal/efectos de los fármacos , delta-5 Desaturasa de Ácido Graso , Eritrocitos/química , Eritrocitos/efectos de los fármacos , Femenino , Linoleoil-CoA Desaturasa , Hígado/química , Hígado/efectos de los fármacos , Masculino , Microsomas Hepáticos/efectos de los fármacos , Microsomas Hepáticos/enzimología , Fosfolípidos/química , Saimiri , Estearoil-CoA Desaturasa/metabolismoRESUMEN
Los ácidos grasos polinsaturados (AGP) derivados de los ácidos grasos esenciales (AGE) tienen importantes roles en la formación y mantenimiento de estructuras de membrana, jugando un papel trascendente en la síntesis de lípidos estructurales y en el desarrollo neural. Se han señalado anormalidades en las funciones neurológicas de lactantes alimentados con fórmulas con respecto a lactantes alimentados con leche materna y se conoce el efecto de la desnutrición calórico-proteica sobre la composición en AGP de algunos tejidos. En este trabajo se estudió el efecto de diferentes fórmulas comerciales sobre la composición en ácidos grasos de los fosfolípidos de plasma y eritrocitos. Se seleccionaron tres grupos de lactantes desnutridos por causa socioeconómicoculturales nacidos a término: dos recibieron fórmulas (una de ellas sólo aportó ácidos linoleicos y alfa- linolénicos y la otra contenía además agragados ácidos grasos polinsaturados de mayor longitud de cadenas derivados de ambas series: n-3 y n-6 y el tercer grupo, alimentado con leche materna, se consideró como control. Se determinó la composición de ácidos grasos de los fosfolipídos de plasma y eritrocitos por cromatografía gas-líquido. Los resultados mostraron, en lactantes alimentados con fórmulas, mayor proporción de ácidos saturados y monoetilénicos, y menor porcentaje en el total de ácidos polinsaturados con respecto a los alimentados con leche materna. Estas diferecias son más marcadas en los que recibieron fórmulas sin suplemento AGP. Seconcluye que en lactante desnutridos el uso de fórmulas enriquecidasen ácidos grasos polinsaturados logra restaurar en parte, el perfil de ácidos grasos en fosfolipídos de plasma y eritrocitos, que se asemeja al de los que reciben leche materna, y es diferente a los alimentados con fórmulas comunes. (AU)
Asunto(s)
Humanos , Masculino , Femenino , Lactante , RESEARCH SUPPORT, NON-U.S. GOVT , Ácidos Grasos/análisis , Fosfolípidos/química , Plasma/química , Eritrocitos/química , Trastornos de la Nutrición del Lactante/metabolismo , Lactancia Materna , Alimentos Infantiles , Fosfolípidos/sangre , Ácidos Grasos Insaturados/análisis , Desnutrición Proteico-Calórica/metabolismoRESUMEN
Los ácidos grasos polinsaturados (AGP) derivados de los ácidos grasos esenciales (AGE) tienen importantes roles en la formación y mantenimiento de estructuras de membrana, jugando un papel trascendente en la síntesis de lípidos estructurales y en el desarrollo neural. Se han señalado anormalidades en las funciones neurológicas de lactantes alimentados con fórmulas con respecto a lactantes alimentados con leche materna y se conoce el efecto de la desnutrición calórico-proteica sobre la composición en AGP de algunos tejidos. En este trabajo se estudió el efecto de diferentes fórmulas comerciales sobre la composición en ácidos grasos de los fosfolípidos de plasma y eritrocitos. Se seleccionaron tres grupos de lactantes desnutridos por causa socioeconómicoculturales nacidos a término: dos recibieron fórmulas (una de ellas sólo aportó ácidos linoleicos y alfa- linolénicos y la otra contenía además agragados ácidos grasos polinsaturados de mayor longitud de cadenas derivados de ambas series: n-3 y n-6 y el tercer grupo, alimentado con leche materna, se consideró como control. Se determinó la composición de ácidos grasos de los fosfolipídos de plasma y eritrocitos por cromatografía gas-líquido. Los resultados mostraron, en lactantes alimentados con fórmulas, mayor proporción de ácidos saturados y monoetilénicos, y menor porcentaje en el total de ácidos polinsaturados con respecto a los alimentados con leche materna. Estas diferecias son más marcadas en los que recibieron fórmulas sin suplemento AGP. Seconcluye que en lactante desnutridos el uso de fórmulas enriquecidasen ácidos grasos polinsaturados logra restaurar en parte, el perfil de ácidos grasos en fosfolipídos de plasma y eritrocitos, que se asemeja al de los que reciben leche materna, y es diferente a los alimentados con fórmulas comunes.
Asunto(s)
Humanos , Masculino , Femenino , Lactante , Lactancia Materna , Eritrocitos/química , Ácidos Grasos/análisis , Alimentos Infantiles , Trastornos de la Nutrición del Lactante/metabolismo , Fosfolípidos/química , Plasma/química , Ácidos Grasos Insaturados/análisis , Fosfolípidos/sangre , Desnutrición Proteico-Calórica/metabolismoRESUMEN
Se estudió el efecto de la administración de aceite de maíz con la dieta sobre el metabolismo de los ácidos grasos esenciales (AGE) en lactantes normales y desnutridos alimentados solamente con leche de vaca desde el nacimiento. Se seleccionó también un grupo de lactantes alimentados con leche materna. Se usó como parámetro bioquímico para evaluar las condiciones en que se encontraban los AGE la composición en ácidos grasos de los fosfolípidos del plasma. Se observó un cuadro consistente con una carencia en AGE tanto en lactantes normales como desnutridos alimentados con leche de vaca, es decir, una disminución de la proporción de los ácidos grasos de la serie n6 y un aumento de los ácidos grasos saturados. Calculando la relación precursor-productos de los ácidos polietilénicos se observó una alteración del metabolismo del ácido linoleico. La administración del aceite de maíz restauró el perfil de los ácidos grasos a valores normales aun en los lactantes desnutridos a pesar de que el síndrome clínico de la desnutrición no había sido corregido
Asunto(s)
Recién Nacido , Lactante , Humanos , Masculino , Femenino , Ácidos Grasos Esenciales/metabolismo , Desnutrición Proteico-Calórica/metabolismo , Leche/química , Aceite de Maíz/metabolismo , Fosfolípidos/metabolismo , Ácidos Grasos Esenciales/sangre , Ácidos Linoleicos/metabolismo , Cromatografía de Gases , Alimentos Fortificados , Leche Humana/química , Aceite de Maíz/análisis , Fosfolípidos/sangreRESUMEN
Se estudió el efecto de la administración de aceite de maíz con la dieta sobre el metabolismo de los ácidos grasos esenciales (AGE) en lactantes normales y desnutridos alimentados solamente con leche de vaca desde el nacimiento. Se seleccionó también un grupo de lactantes alimentados con leche materna. Se usó como parámetro bioquímico para evaluar las condiciones en que se encontraban los AGE la composición en ácidos grasos de los fosfolípidos del plasma. Se observó un cuadro consistente con una carencia en AGE tanto en lactantes normales como desnutridos alimentados con leche de vaca, es decir, una disminución de la proporción de los ácidos grasos de la serie n6 y un aumento de los ácidos grasos saturados. Calculando la relación precursor-productos de los ácidos polietilénicos se observó una alteración del metabolismo del ácido linoleico. La administración del aceite de maíz restauró el perfil de los ácidos grasos a valores normales aun en los lactantes desnutridos a pesar de que el síndrome clínico de la desnutrición no había sido corregido (AU)