RESUMEN
We have previously demonstrated that mononuclear leukocytes from patients with sickle cell disease (SCD) release higher amounts of superoxide compared with normal controls. The aim of this study was to further study the NADPH oxidase system in these patients by investigating gene expression of NADPH oxidase components, phosphorylation of p47(phox) component, and the release of cytokines related to NADPH oxidase activation in mononuclear leukocytes from patients with SCD. gp91(phox) gene expression was significantly higher in monocytes from SCD patients compared with normal controls (P=0.036). Monocytes from SCD patients showed higher levels of p47(phox) phosphorylation compared with normal controls. INF-gamma release by lymphocytes from SCD patients was significantly higher compared with normal controls, after 48 h culture with phytohemagglutinin (P=0.02). The release of TNF-alpha by monocytes from SCD patients and normal controls was similar after 24 and 48 h culture with lipopolysaccharide (P>0.05). We conclude that monocytes from SCD patients show higher levels of gp91(phox) gene expression and p47(phox) phosphorylation, along with increased IFN-gamma release by SCD lymphocytes. These findings help to explain our previous observation showing the increased respiratory burst activity of mononuclear leukocytes from SCD patients and may contribute to inflammation and tissue damage in these patients.
Asunto(s)
Anemia de Células Falciformes/metabolismo , Interferón gamma/biosíntesis , Leucocitos/metabolismo , NADPH Oxidasas/metabolismo , Regulación hacia Arriba , Adolescente , Adulto , Femenino , Regulación Enzimológica de la Expresión Génica , Humanos , Isoenzimas/genética , Isoenzimas/metabolismo , Masculino , Persona de Mediana Edad , NADPH Oxidasas/genética , Fosforilación , ARN Mensajero/genética , Transcripción Genética/genética , Factor de Necrosis Tumoral alfa/biosíntesisRESUMEN
Objetivo: Investigar a liberaçäo espontânea e estimulada (com forbol miristato acetato - PMA) de superóxido por granulócitos e células mononucleares de adolescentes e crianças asmáticos classificadas segundo os critérios do relatório Iniciativa Global para Asma (GINA) de 1997. Métodos: Selecionamos 30 pacientes de seis a quinze anos, e os classificamos como tendo asma intermitente leve (AIL, n=9), persistente leve (APL,n=8), persistente moderada (APM,n=7) e persistente grave (APG, n=6). Os granulócitos e células mononucleares foram fracionados a partir de amostras do sangue periféricos por gradiente de densidade descontínuo. A cinética de liberaçäo de superóxido (0,5,15,25, 45, e 60 minutos) foi avaliada segundo a reduçäo do citocromo c, especificamente inibida pela superóxido dismutase. Os resultados foram comparados com os de 18 adultos sadios por análise de variância. Resultados: A liberaçäo espontânea de superóxido pelos granulócitos foi significamente maior, aos 25 minutos, nos grupos APL, APM e APG comparado aos grupos de indivíduos sadios e AIL (p<0,05), aos 45 minutos nos grupos APL e APM e aos 60 minutos nos grupos APG. A liberaçäo de superóxido pelos granulócitos estimulados com PMA, foi significamente maior nos grupos APM e APG que nos indivíduos sadios, em todos os tempos. Näo houve diferença significativa na liberaçäo de superóxido por células mononucleares, estimuladas ou näo com PMA, entre os diversos grupos de asmáticos e indivíduos sadios