RESUMEN

The cell surface protein CD34 is expressed in various human tissues and cells, including hematopoietic stem cells, vascular endothelial cells, mucosal dendritic cells, mast cells, eosinophils, microglia, fibrocytes, muscle satellite cells, and platelets. There is a lack of data on the expression of CD34 in canine and porcine tissues. Therefore, we designed a series of immunoblotting, immunohistochemistry, and immunofluorescence experiments to observe CD34 expression in murine, canine, and porcine lungs. We used a rabbit antibody (clone EP373Y) to target the conserved human CD34 C-terminal region and validated its immunoreactivity against mouse lung homogenates. The data showed diffuse bronchiolar and alveolar epithelial localization of CD34 protein in normal murine, canine, and porcine lungs. At 9 or 24 h after bacterial endotoxin exposure, murine CD34 protein shifted to specific bronchoalveolar cells with a punctate pattern, as quantified by CD34 fluorescence. Specific porcine bronchoalveolar cells and leukocytes had significant CD34-positive immunostaining after H3N1 influenza infection. Thus, our study provides fundamental data on the expression of CD34 in lungs and validates an antibody for use in further experiments in these animal species.

La protéine de surface cellulaire CD34 est exprimée dans divers tissus et cellules humains, y compris les cellules souches hématopoïétiques, les cellules endothéliales vasculaires, les cellules dendritiques des muqueuses, les mastocytes, les éosinophiles, la microglie, les fibrocytes, les cellules satellites musculaires et les plaquettes. Il existe un manque de données sur l'expression de CD34 dans les tissus canins et porcins. Par conséquent, nous avons conçu une série d'expériences d'immunobuvardage, d'immunohistochimie et d'immunofluorescence pour observer l'expression de CD34 dans les poumons murins, canins et porcins. Nous avons utilisé un anticorps de lapin (clone EP373Y) pour cibler la région C-terminale conservée du CD34 humain et validé son immunoréactivité contre des homogénats pulmonaires de souris. Les données ont montré une localisation épithéliale bronchiolaire et alvéolaire diffuse de la protéine CD34 dans les poumons normaux murins, canins et porcins. À 9 ou 24 h après l'exposition à l'endotoxine bactérienne, la protéine CD34 murine s'est déplacée vers des cellules bronchoalvéolaires spécifiques avec un motif ponctué, tel que quantifié par la fluorescence envers CD34. Des cellules bronchoalvéolaires et des leucocytes porcins spécifiques présentaient une immunocoloration significativement positive pour CD34 après une infection par le virus de l'influenza H3N1. Ainsi, notre étude fournit des données fondamentales sur l'expression de CD34 dans les poumons et valide un anticorps à utiliser dans d'autres expériences chez ces espèces animales.(Traduit par Docteur Serge Messier).

Asunto(s)

RESUMEN

BACKGROUND: CD34, a pan-selectin binding protein when glycosylated, has been shown to be involved in leukocyte migration to the site of inflammation. However, only one report is available on the expression and role of CD34 in neutrophil recruitment during acute lung inflammation. METHODS: We proceeded to study the role of CD34 in lung neutrophil migration using mouse model of endotoxin induced acute lung inflammation and studied over multiple time points, in generic CD34 knock-out (KO) strain. RESULTS: While there was no difference in BAL total or differential leukocyte counts, lung MPO content was lower in LPS exposed KO compared to WT group at 3 h time-point (p = 0.0308). The MPO levels in CD34 KO mice begin to rise at 9 h (p = 0.0021), as opposed to an early 3 h rise in WT mice (p = 0.0001), indicating that KO mice display delays in lung neutrophil recruitment kinetics. KO mice do not loose endotoxin induced lung vascular barrier properties as suggested by lower BAL total protein at 3 h (p = 0.0452) and 24 h (p = 0.0113) time-points. Several pro-inflammatory cytokines and chemokines (TNF-α, IL-1ß, KC, MIP-1α, IL-6, IL-10 and IL-12 p70 sub-unit; p < 0.05) had higher levels in WT compared to KO group, at 3 h. Lung immunofluorescence in healthy WT mice reveals CD34 expression in the bronchiolar epithelium, in addition to alveolar septa. CONCLUSION: Thus, given CD34's pan-selectin affinity, and expression in the bronchiolar epithelium as well as alveolar septa, our study points towards a role of CD34 in lung neutrophil recruitment but not alveolar migration, cytokine expression and lung inflammation.

Asunto(s)