RESUMEN

Se desarrolló un método de Elisa indirecto para el pesquisaje masivo de anticuerpos de ratón contra el virus de la inmunodeficiencia humanos (VIH-1) en sobrenadantes de hibridomas y sueros de animales hiperinmunes. Para la normalización del sistema se evaluaron la concentración de antígeno adsorbida a la fase sólida, la solución tampón diluyente de las muestras, las disoluciones óptimas para cada tipo de muestras y el período de incubación de éstos. Se determinó que una concentración de 5 *g/mL de proteinas virales semipurificadas, una solución tampón de fosfato pH 7,4; 0,1 con tween-20 al 0,05

y albúmina bovina sérica al 1,5

, disoluciones del suero hiperinmune(controles +) y no inmunes (controles -) de 1:2500 y un tiempo de incubación de 18 h a 4-C, ofrecián los mejores resultados. Se obtienen coeficientes de variación interplacas intraplaca por debajo del 5

para los controles positivo/negativo es mayor de 10 en todos los casos

Asunto(s)

RESUMEN

Se desarrolló un método de Elisa indirecto para el pesquisaje masivo de anticuerpos de ratón contra el virus de la inmunodeficiencia humanos (VIH-1) en sobrenadantes de hibridomas y sueros de animales hiperinmunes. Para la normalización del sistema se evaluaron la concentración de antígeno adsorbida a la fase sólida, la solución tampón diluyente de las muestras, las disoluciones óptimas para cada tipo de muestras y el período de incubación de éstos. Se determinó que una concentración de 5 *g/mL de proteinas virales semipurificadas, una solución tampón de fosfato pH 7,4; 0,1 con tween-20 al 0,05% y albúmina bovina sérica al 1,5%, disoluciones del suero hiperinmune(controles +) y no inmunes (controles -) de 1:2500 y un tiempo de incubación de 18 h a 4-C, ofrecián los mejores resultados. Se obtienen coeficientes de variación interplacas intraplaca por debajo del 5% para los controles positivo/negativo es mayor de 10 en todos los casos

Asunto(s)

RESUMEN

Se utilizó el sistema conservatorio de detección de anticuerpos al VIH-1 "DAVIH-blot", basado en la inmunoelectrotransferencia y desarrollado en nuestros laboratorios como sistema de confirmación para sueros humanos, como sistema de referencia para normalizar una variante adecuada para el estudio de sueros de ratones hiperinmunes, líquidos ascíticos y sobrenadante de cultivo de hibridomas de ratón. Se compararon las siguientes variaciones de la etapa inmunológica: soluciones amortiguadoras para la dilución de las muestras y conjugados, soluciones bloqueadoras, temperatura y tiempo de incubación, y se determinaron las condiciones experimentales óptimas: usar como solución amortiguadora para la dilución de las muestras y conjugados, una solución de Tris-0,02M-NaCl0,5 con Tween-20 al 0,05

(TNT), no usar solucion bloqueadora antes de la adición del conjugado e incubar el antisuero conjugado 1 hora a 37 -C

Asunto(s)

RESUMEN

Se utilizó el sistema conservatorio de detección de anticuerpos al VIH-1 "DAVIH-blot", basado en la inmunoelectrotransferencia y desarrollado en nuestros laboratorios como sistema de confirmación para sueros humanos, como sistema de referencia para normalizar una variante adecuada para el estudio de sueros de ratones hiperinmunes, líquidos ascíticos y sobrenadante de cultivo de hibridomas de ratón. Se compararon las siguientes variaciones de la etapa inmunológica: soluciones amortiguadoras para la dilución de las muestras y conjugados, soluciones bloqueadoras, temperatura y tiempo de incubación, y se determinaron las condiciones experimentales óptimas: usar como solución amortiguadora para la dilución de las muestras y conjugados, una solución de Tris-0,02M-NaCl0,5 con Tween-20 al 0,05 %(TNT), no usar solucion bloqueadora antes de la adición del conjugado e incubar el antisuero conjugado 1 hora a 37 -C

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