RESUMEN

Ca2+ -activated Cl- channels (CaCCs) are anionic channels that regulate many important physiological functions associated with chloride and calcium flux in some somatic cells. The molecular identity of CaCCs was revealed to be TMEM16A and TMEM16B (also known as Anoctamin or ANO1 and ANO2, respectively) in all eukaryotes. A recent study suggests the presence of TMEM16A in human sperm and a relationship with the rhZP-induced acrosome reaction. However, to the best of our knowledge, little is known about the role of TMEM16A in other spermatic processes such as capacitation or motility. In this study, we evaluated the effects of two TMEM16A antagonists on capacitation, acrosome reaction, and motility in guinea pig sperm; these antagonists were T16Ainh-A01, belonging to a second generation of potent antagonists of TMEM16A, and niflumic acid (NFA), a well-known antagonist of TMEM16A (CaCCs). First of all, we confirmed that the absence of Cl- in the capacitation medium changes motility parameters, capacitation, and the progesterone-induced acrosome reaction. Using a specific antibody, TMEM16A was found as a protein band of ∼120 kDa, which localization was in the apical crest of the acrosome and the middle piece of the flagellum. Inhibition of TMEM16A by T16Ainh-A01 affected sperm physiology by reducing capacitation, blocking the progesterone-induced acrosome reaction under optimal capacitation conditions, inhibiting progressive motility, and the acquisition of hyperactivated motility, diminishing [Ca2+ ]i, and increasing [Cl- ]i. These changes in sperm kinematic parameters provide new evidence of the important role played by TMEM16A in the production of sperm capable of fertilizing oocytes.

Asunto(s)

RESUMEN

Prior to fertilization, mammalian sperm undergo several molecular, biochemical and physiological changes in a process termed capacitation. However, the mechanisms explaining the involvement of cytoskeletal remodeling and membrane re-ordering in each process prior to fertilization remain poorly understood. We found that the migration of both flotillin microdomains and Src family kinases towards the apical ridge of guinea pig sperm occurs under capacitating conditions. This re-ordering is associated with spectrin cleavage by calpain. Moreover, Src, Fyn, Lyn and Hck interact with flotillin-1; this interaction increases in a capacitation-dependent manner and the increased autophosphorylation of these kinases is linked to flotillin-1 association. The aforementioned results are prevented by the inhibition of calpain by calpeptin. Thus, spectrin cytoskeleton cleavage during capacitation seems to precede the reorganization of flotillin microdomains and Src family kinases towards the apical ridge of the sperm head in order to initiate the signaling cascade required for proper capacitation and further acrosome reaction. The significance of the Src family kinase reorganization for capacitation is demonstrated by the inhibition of calpain during capacitation also preventing the Src-family-kinase-dependent phosphorylation of FAK at Tyr576/577. Our work further highlights the scaffolding properties of flotillin microdomains and reveals the importance of their large-scale segregation during capacitation.

Asunto(s)

RESUMEN

Platelets are the most prominent elements of blood tissue involved in hemostasis at sites of blood vessel injury. Platelet cytoskeleton is responsible for their shape modifications observed during activation and adhesion to the substratum; therefore the interactions between cytoskeleton and plasma membrane are critical to modulate blood platelet functions. Several cytoskeletal components and binding partners, as well as enzymes that regulate the cytoskeleton, localize to membrane/lipid rafts (MLR) and regulate lateral diffusion of membrane proteins and lipids. Resting, thrombin-activated, and adherent human platelets were processed for biochemical studies including western-blot and immunprecipitation assays and confocal analysis were performed to characterize the interaction of MLR with the main cytoskeleton elements and ß-dystroglycan as well as with the association of caveolin-1 PY14 with focal adhesion proteins. We transfected a megakaryoblast cell line (Meg-01) to deplete ß-dystroglycan, subsequent to their differentiation to the platelet progenitors. Our data showed a direct interaction of the MLR with cytoskeleton to regulate platelet shape, while an association of caveolin-1 PY14 with vinculin is needed to establish focal adhesions, which are modulated for ß-dystroglycan. In conclusion, caveolin-1 PY14 in association with platelet cytoskeleton participate in focal adhesions dynamics.

Asunto(s)

RESUMEN

Mammalian fertilization is completed by direct interaction between sperm and egg. This process is primarily mediated by both adhesion and membrane-fusion proteins found on the gamete surface. ADAM1, 2, and 3 are members of the ADAMs protein family, and have been involved in sperm-egg binding. In this study, we demonstrate the proteolytic processing of ADAM15 during epididymal maturation of guinea pig spermatozoa to produce a mature form a size of 45 kDa. We find that the size of the mature ADAM15, 45 kDa, in cauda epididymal spermatozoa indicates that the pro-domain and metalloprotease domain are absent. In addition, using indirect immunofluorescence, ADAM15 was found throughout the acrosome, at the equatorial region and along the flagellum of guinea pig spermatozoa. After acrosome reaction, ADAM15 is lost from the acrosomal region and retained in the equatorial region and flagellum. In this study, we also report the first evidence of a complex between ADAM15 and acrogranin. By immunoprecipitation, we detected a protein band of 65 kDa which co-immunoprecipated together ADAM15. Analysis of the N-terminal sequence of this 65 kDa protein has revealed its identity as acrogranin. In addition, using cell-surface labeling, ADAM15 was found to be present on the cell surface. Assays of heterologous fertilization showed that the antibody against acrogranin inhibited the sperm-egg adhesion. Interestingly, ADAM15 and acrogranin were also found associated in two breast cancer cell lines. In conclusion, our results demonstrated that ADAM15 and acrogranin are present on and associated with the surface of guinea pig spermatozoa; besides both proteins may play a role during sperm-egg binding.

Asunto(s)

RESUMEN

La rubéola es una enfermedad infectocontagiosa que afecta a niños y adultos jóvenes, y cuando esta se produce en el primer trimestre del embarazo ocasiona malformaciones congénitas en el feto. En el Laboratorio Nacional de Referencia de Sarampión, Rubéola y Parotiditis del Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí, se realizó la detección del índice de avidez relativo (IAR) de la IgG en 15 pares de sueros correspondientes a igual número de pacientes adultos que enfermaron durante un brote de rubéola ocurrido en dos provincias de Cuba en el 2004, los cuales fueron positivos a anticuerpos de tipo IgM específicos al virus, y en algunos se encontró seroconversión o un aumento de cuatro veces el título entre los sueros de la fase aguda y convaleciente con la técnica de inhibición de la hemaglutinación. En 13 (86,6 por ciento) de los pacientes estudiados se detectó infección primaria, mientras que en dos (13,3 por ciento) de ellos la infección fue secundaria. La detección de la avidez de la IgG constituye un método alternativo útil para distinguir una infección primaria de una secundaria al virus de la rubéola y fortalece el diagnóstico de esta enfermedad en Cuba(AU)

Rubella infectious diseases affect children and young adults and when they occur during the first trimester of pregnancy, cause congenital malformations in the newborn. In the National Reference Laboratory (NLR) of measles, rubella and mumps from the Tropical Medicine Institute Pedro Kourí, the IgG Avidity Index (AI) detection was carried out to 15 paired serum samples, which corresponded to same number of patients infected with this virus in two Cuban provinces in 2004. The samples were positive to virus- specific IgM antibodies, in addition seroconversion or an increase of > 4 fold of the titers in the sera of the acute and convalescence phase using the hemagglutination inhibition assay (HIA). The AI value showed a primary infection to rubella virus in 13 (86.6 per cent) of the patients studied, and a secondary infection in 2 (13.3 percent) of them. The IgG avidity antibody detection is a reliable alternative tool for distinguishing between primary and secondary rubella virus infection and for strengthing the diagnosis of this disease in Cuba(AU)

Asunto(s)

RESUMEN

Se creó un programa a partir de 1988 por las autoridades de salud en Cuba, en el cual se trazó como meta eliminar el sarampión, la rubéola y la parotiditis. Sus bases fundamentales fueron alcanzar coberturas de vacunación superiores a 95 por ciento con la vacuna triple viral (sarampión, rubéola y parotiditis), implantar un sólido sistema de vigilancia seroepidemiológica y lograr medidas de control de foco, con lo cual cesaría la transmisión del virus salvaje productor de estas entidades. Con el fin de conocer el estado inmune de la población a más de 10 años de iniciarse la vacunación con la triple viral, se realizó una encuesta seroepidemiológica a una muestra representativa de la población cubana entre 7 meses y 23 años. Se estudió un total de 1 593 muestras mediante la prueba de inhibición de la hemaglutinación. La prevalencia de anticuerpos detectada fue de 86,75 por ciento para sarampión, 64,72 por ciento para rubéola y 86 por ciento para parotiditis. La inmunidad a los virus del sarampión y rubéola fue menor en el grupo de 6 a 10 años y en el caso de la parotiditis en los niños entre 2 y 5 años. Se sugirió incluir en el programa nacional de vacunación, una segunda dosis de la vacuna triple viral en los niños de 6 años o más, para eliminar la circulación de estos agentes infecciosos en la población(AU)

Asunto(s)

RESUMEN

Se creó un programa a partir de 1988 por las autoridades de salud en Cuba, en el cual se trazó como meta eliminar el sarampión, la rubéola y la parotiditis. Sus bases fundamentales fueron alcanzar coberturas de vacunación superiores a 95 % con la vacuna triple viral (sarampión, rubéola y parotiditis), implantar un sólido sistema de vigilancia seroepidemiológica y lograr medidas de control de foco, con lo cual cesaría la transmisión del virus salvaje productor de estas entidades. Con el fin de conocer el estado inmune de la población a más de 10 años de iniciarse la vacunación con la triple viral, se realizó una encuesta seroepidemiológica a una muestra representativa de la población cubana entre 7 meses y 23 años. Se estudió un total de 1 593 muestras mediante la prueba de inhibición de la hemaglutinación. La prevalencia de anticuerpos detectada fue de 86,75 % para sarampión, 64,72 % para rubéola y 86 % para parotiditis. La inmunidad a los virus del sarampión y rubéola fue menor en el grupo de 6 a 10 años y en el caso de la parotiditis en los niños entre 2 y 5 años. Se sugirió incluir en el programa nacional de vacunación, una segunda dosis de la vacuna triple viral en los niños de 6 años o más, para eliminar la circulación de estos agentes infecciosos en la población.

The Cuban health authorites implemented a program in 1988 aimed at eradicating measles, rubella and parotiditis. Its fundamental bases were to attain vaccination coverages over 95 % with the viral triple vaccine (measles, rubella and parotiditis), to establish a solid system of seroepidemiological surveillance and to take measures to control the focus, with which the trasmission of the wild virus producing these entities would stop. In order to know the immune state of the population a seroepidemiological survey was done in a representative sample of the Cuban population from 7 months old to 23 years old. A total of 1 593 samples were studied by the hemagluttination inhibition test. The prevalence of antibodies detected was 86.75 % for measles, 64.72 % for rubella and 86 % for parotiditis. The immunity to the measles and rubella viruses was slower in the group aged 6-10 and in children aged 2-5 in the case of parotiditis. It was suggested to include in the national vaccination program a second dose of the viral triple vaccine in children 6 or over to eliminate the circulation of these infectious agents in the population.

RESUMEN

Se empleó la técnica de neutralización por reducción del número de placas (NRNP) para la detección de anticuerpos antirrábicos en personal de riesgo. Se estudiaron muestras de suero de individuos de alto riesgo y personas con antecedentes de vacunación y sin estos. La técnica de neutralización fue comparada con la prueba biológica en ratón y como resultado del estudio se obtuvo una concordancia de 100 por ciento. Se encontró que el sexo no influye en la respuesta de anticuerpos a este virus, aunque el contacto directo y la cantidad de veces que el individuo ha recibido la vacuna actúan positivamente en la respuesta inmune. La introducción de esta técnica en el laboratorio permite contar con una herramienta útil, en el seguimiento del personal que recibe vacunación preexposición y posexposición al virus rábico(AU)

Asunto(s)

RESUMEN

Se empleó la técnica de neutralización por reducción del número de placas (NRNP) para la detección de anticuerpos antirrábicos en personal de riesgo. Se estudiaron muestras de suero de individuos de alto riesgo y personas con antecedentes de vacunación y sin estos. La técnica de neutralización fue comparada con la prueba biológica en ratón y como resultado del estudio se obtuvo una concordancia de 100 por ciento. Se encontró que el sexo no influye en la respuesta de anticuerpos a este virus, aunque el contacto directo y la cantidad de veces que el individuo ha recibido la vacuna actúan positivamente en la respuesta inmune. La introducción de esta técnica en el laboratorio permite contar con una herramienta útil, en el seguimiento del personal que recibe vacunación preexposición y posexposición al virus rábico

Asunto(s)

RESUMEN

The neutralization technique by reducing the number of plaques (NRNP) for detecting antirabic antibodies in personnel at risk was used. Serum samples from individuals at high risk and from persons with vaccination antecedents and without them were studied. The neutralization technique was compared with the biological technique in mouses and as a result of the study it was obtained a concordance of 100%. It was found that sex does not influence on the response of the antibodies to this virus, although the direct contact and the number of times that the individual has received the vaccine act positively on the immune response. The introduction of this technique in the laboratory allows to have a useful tool for the follow-up of the personnel receiving the vaccine before and after being exposed to the rabies virus.

Asunto(s)

RESUMEN

Se estudiaron 225 monosueros de pacientes (121 adultos y 104 niños), con diferentes hemopatías malignas procedentes del Instituto de Hematología, a los cuáles se les realizaron las técnicas de inhibición de la hemaglutinación (IH) y neutralización para conocer la presencia de anticuerpos antisarampión. Todos estos pacientes tenían tratamiento inmunosupresor a la toma de la muestra y los niños habían recibido la vacuna triple viral (sarampión, rubéola y parotiditis) antes de ser diagnosticada la enfermedad. Se encontró que 51 (42,14 por ciento) de las muestras de los adultos fueron positivas por IH y de las 25 negativas, a las cuales se les realizó la técnica de neutralización, fueron positivas 18 (72 por ciento. De los 104 sueros correspondientes a los niños, 31 (29,8 por ciento) muestras resultaron positivas por IH y se estudiaron por neutralización 29 de las que habían resultado negativas. De todas las muestras 18,34 por ciento continuó negativo por ambos métodos. Con las 2 técnicas empleadas, la presencia de anticuerpos al virus del sarampión fue de 81,66 por ciento en los niños y de 90,78 por ciento en los adultos(AU)

Asunto(s)

RESUMEN

225 monosera from patients (121 adults and 104 children) with different malignant haemopathies from the Institute of Hematology were studied. The hemagglutination inhibition (HI) technique and the neutralization technique were used to know the presence of antimeasles antibodies. All these patients were under immunosuppression treatment at the time of taking the specimen and children had received the triple viral vaccine (measles, rubella, parotiditis) before the disease was diagnosed. It was found that 51 (42.14) of the adults' specimens were positive by HI and of the 25 negative specimens that underwent the neutralization technique, 18 (72) proved to be positive. Of the 104 sera corresponding to children, 31 (29.8) specimens were positive by HI, whereas 29 of the negative were studied by neutralization. 18.34 of all the specimens continued to be negative by both methods. According with the 2 techniques used, the presence of measles virus antibodies was of 81.66 in children and of 90.78 in adults.

Asunto(s)