RESUMEN

Dendritic cells (DC) are the most potent antigen-presenting cells of the immune system and are able to sensitize even naïve T cells. Mature DC are characterized by expression of CD83, a surface molecule that is proposed to be involved in efficient T cell activation. It has been recently shown that CD83 mRNA is transported from the nucleus to the cytoplasm in a HuR- and CRM1-dependent manner. Therefore we here investigated the impact of two known protein ligands of HuR, pp32 and APRIL, on CD83 expression. Both pp32 (ANP32A) and APRIL (ANP32B) are shuttle proteins, and it has been reported earlier that these HuR ligands can act as adaptors that link HuR and the CRM1-specific nuclear export pathway. By employing RNA interference (RNAi) technology we demonstrate that pp32 is dispensable for CD83 expression, whereas APRIL contributes to the nuclear export and subsequent translation of CD83 mRNA. Furthermore, we have determined the nuclear import signal (NLS) as well as the nuclear export signal (NES) of human APRIL. Moreover, we analyzed the status of phosphorylation of endogenous APRIL and identified threonine 244 to be an as yet unrecognized phosphate acceptor. Finally, we were able to show that phosphorylation of this specific amino acid residue regulates the nuclear export of APRIL. In sum, we report here the signal sequences in APRIL that mediate its intracellular trafficking and provide evidence that this protein ligand of HuR is an important player in the post-transcriptional regulation of CD83 expression by affecting the nucleocytoplasmic translocation of CD83 mRNA.

Asunto(s)

Antígenos CD/biosíntesis , Antígenos de Superficie/metabolismo , Núcleo Celular/metabolismo , Células Dendríticas/metabolismo , Regulación de la Expresión Génica/fisiología , Inmunoglobulinas/biosíntesis , Glicoproteínas de Membrana/biosíntesis , Proteínas de Unión al ARN/metabolismo , Miembro 13 de la Superfamilia de Ligandos de Factores de Necrosis Tumoral/metabolismo , Transporte Activo de Núcleo Celular/fisiología , Animales , Presentación de Antígeno/inmunología , Antígenos CD/genética , Antígenos CD/inmunología , Antígenos de Superficie/genética , Antígenos de Superficie/inmunología , Células COS , Núcleo Celular/genética , Núcleo Celular/inmunología , Chlorocebus aethiops , Citoplasma/genética , Citoplasma/inmunología , Citoplasma/metabolismo , Células Dendríticas/citología , Células Dendríticas/inmunología , Proteínas ELAV , Proteína 1 Similar a ELAV , Células HeLa , Humanos , Inmunoglobulinas/genética , Inmunoglobulinas/inmunología , Péptidos y Proteínas de Señalización Intracelular/genética , Péptidos y Proteínas de Señalización Intracelular/inmunología , Péptidos y Proteínas de Señalización Intracelular/metabolismo , Células Jurkat , Ligandos , Glicoproteínas de Membrana/genética , Glicoproteínas de Membrana/inmunología , Ratones , Células 3T3 NIH , Proteínas Nucleares/genética , Proteínas Nucleares/inmunología , Proteínas Nucleares/metabolismo , Fosforilación , Procesamiento Proteico-Postraduccional/fisiología , Señales de Clasificación de Proteína/fisiología , ARN Mensajero/biosíntesis , ARN Mensajero/genética , ARN Mensajero/inmunología , Proteínas de Unión al ARN/genética , Proteínas de Unión al ARN/inmunología , Linfocitos T/citología , Linfocitos T/inmunología , Linfocitos T/metabolismo , Miembro 13 de la Superfamilia de Ligandos de Factores de Necrosis Tumoral/genética , Miembro 13 de la Superfamilia de Ligandos de Factores de Necrosis Tumoral/inmunología , Antígeno CD83