RESUMEN
Trypanosoma cruzi is the etiological agent of Chagas disease, a neglected and emerging tropical disease, endemic to South America and present in non-endemic regions due to human migration. The MASP multigene family is specific to T. cruzi, accounting for 6% of the parasite's genome and plays a key role in immune evasion. A common feature of MASPs is the presence of two conserved regions: an N-terminal region codifying for signal peptide and a C-terminal (C-term) region, which potentially acts as GPI-addition signal peptide. Our aim was the analysis of the presence of an immune response against the MASP C-term region. We found that this region is highly conserved, released via exovesicles (EVs) and has an associated immune response as revealed by epitope affinity mapping, IFA and inhibition of the complement lysis assays. We also demonstrate the presence of a fast IgM response in Balb/c mice infected with T. cruzi. Our results reveal the presence of non-canonical secreted peptides in EVs, which can subsequently be exposed to the immune system with a potential role in evading immune system targets in the parasite.
Asunto(s)
Antígenos de Protozoos/química , Enfermedad de Chagas/inmunología , Vesículas Extracelulares/metabolismo , Serina Proteasas Asociadas a la Proteína de Unión a la Manosa/química , Trypanosoma cruzi/inmunología , Animales , Anticuerpos Antiprotozoarios/sangre , Antígenos de Protozoos/metabolismo , Enfermedad de Chagas/sangre , Modelos Animales de Enfermedad , Mapeo Epitopo , Humanos , Inmunoglobulina M/sangre , Serina Proteasas Asociadas a la Proteína de Unión a la Manosa/metabolismo , Ratones , Ratones Endogámicos BALB C , Familia de Multigenes , Trypanosoma cruzi/metabolismoRESUMEN
Las dificultades que aún persisten en el tratamiento de las leishmaniosis justifican el ensayo de la acción de nuevos productos sobre formas del parásito, en la búsqueda de una alternativa terapéutica a esta parasitosis. Dada la necesidad de establecer un procedimiento para evaluar la actividad in vitro de productos naturales y sintéticos en las condiciones cubanas, el propósito de este trabajo fue definir la utilidad del uso del p-nitrofenilfosfato como sustancia cromógena para la cuantificación de parásitos en placas de 96 pozos. Para normalizar este método colorimétrico se establecieron las etapas de la curva de crecimiento del parásito. El estudio de linealidad y selección del volumen de muestra que resultaba óptimo para la realización de los ensayos mostró que con 200 mm se obtuvo el máximo coeficiente de determinación lineal. Asimismo, se comparó el coeficiente de variación en presencia y ausencia del cromógeno y se estudió la influencia de los cambios del medio de cultivo en la lectura de las absorbancias. El límite de cuantificación establecido demostró la necesidad del uso del cromógeno para los propósitos de este trabajo y los resultados en general permiten recomendar esta metodología, menos subjetiva, simple de ejecutar y rápida, para ensayar los productos que resulten de interés en este campo(AU)
Asunto(s)
Técnicas In Vitro , Compuestos Cromogénicos/farmacología , Nitrofenoles/farmacología , LeishmaniaRESUMEN
The existing difficulties in the treatment of leishmaniasis justify the testing of the effect of new products on parasite forms in the search of a therapeutic alternative for the parasitosis. Given the need of establishing a method to evaluate the activity of natural synthetic products in vitro under the Cuban conditions, this paper was aimed at defining the usefulness of p-nitrophenilphosphate as a chromogenic substance for quantification of parasites in plaques from 96 wells. To standardize this colorimetric method the stages of the parasite growth curve were set. The study of linearity and selection of the sample size, which was optional for these assays, showed that it was possible to obtain maximum linear determination coefficient with 20 mm. Likewise, the variation coefficient was compared with and without the chromogen and the effect of changes in culture medium on the reading of absorbances was analyzed. The set limit of quantification proved the need of using chromogen for the purposes of this paper and the general results allow to recommend this less subjective, simpler and quicker methodology to test products of interest in this field.
Asunto(s)
Animales , Agua Dulce/parasitología , Compuestos Cromogénicos , Leishmania , Nitrofenoles , Compuestos Organofosforados , Abastecimiento de Agua , Cuba , Medios de Cultivo , Leishmania , Modelos LinealesRESUMEN
Se describe la normalización de un ultramicroELISA para la detección de anticuerpos IgG anti-antígenos de excreción-secreción de Fasciola hepatica (UME-Fasciola). Se estudió un numeroso grupo de sueros entre los cuales 56 eran de pacientes con fascioliasis, 168 eran de pacientes con otras enfermedades parasitarias y 300 procedían de personas sanas, las cuales fueron utilizadas como controles negativos. Respecto al examen parasitológico considerado como "Regla de Oro", el UME-Fasciola mostró una sensibilidad del 100 por ciento, especificidad de 98 por ciento y valores predictivos para positivos y negativos de 90,3 y 100 por ciento, respectivamente. Sólo se observó reacción cruzada con los sueros de pacientes infectados con Opistorchis felineus. Al comparar el UME-Fasciola con el ELISA convencional se obtuvo un índice de concordancia de 95,5 por ciento(AU)
Asunto(s)
Estudio Comparativo , Humanos , /análisis , Fasciola hepatica/inmunología , Antígenos Helmínticos , Antígenos Helmínticos/inmunología , Fascioliasis/diagnóstico , Fascioliasis/inmunología , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática/métodos , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática/normasRESUMEN
Se describe la normalización de un ultramicroELISA para la detección de anticuerpos IgG anti-antígenos de excreción-secreción de Fasciola hepatica (UME-Fasciola). Se estudió un numeroso grupo de sueros entre los cuales 56 eran de pacientes con fascioliasis, 168 eran de pacientes con otras enfermedades parasitarias y 300 procedían de personas sanas, las cuales fueron utilizadas como controles negativos. Respecto al examen parasitológico considerado como "Regla de Oro", el UME-Fasciola mostró una sensibilidad del 100 por ciento, especificidad de 98 por ciento y valores predictivos para positivos y negativos de 90,3 y 100 por ciento, respectivamente. Sólo se observó reacción cruzada con los sueros de pacientes infectados con Opistorchis felineus. Al comparar el UME-Fasciola con el ELISA convencional se obtuvo un índice de concordancia de 95,5 por ciento
Asunto(s)
Humanos , Anticuerpos Antiidiotipos/análisis , Antígenos Helmínticos/inmunología , Antígenos Helmínticos , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática/normas , Fasciola hepatica/inmunología , Fascioliasis/diagnóstico , Fascioliasis/inmunologíaRESUMEN
Se procedió al fraccionamiento de un extracto soluble de adultos de Fasciola hepatica median~f; una cromatografía en Sephadex G-200, obteniéndose 6 picos bien definidosy simétricos. Se obtuvieron 6 fracciones y de éstas, las 5 primeras resultaron antigénicas al ser enfrentads al antisuero de F hepatica mediante la técnica de contrainmunoelectroforesis (CIEF) y dieron resultados positivos frente al suero de pacientes con fascioliasis, en cambio no se, observó reacción positiva alguna frente a sueros humanós normales. Todas las fracciones, a excepción de los picos IV y V, presentaron reacciones cruzadas al ser entrentadas a sueros de pacientes infectados con Ascaris lumbricoides, Angiostrongylus cantdnensis y Schistosoma mansoni, lo cual demuestra que las fracciones IV y V presentan cierta especificidad para la fascioliasis y pudieran ser utilizadas en el diagnóstico de esta parasitosis a través del uso de la CIEF. Estas fracciones parecen ser componentes proteicos de bajo peso molecular que forman parte de los llamados antígenos metabólicos del parásito, ya que fueron los únicos que dieron resultados positivos al ser enfrentados a un antisuero preparado a partir de los antígenos de excreción-secreción del parásito adulto(AU)