RESUMEN
Se describe un nuevo método para la caracterización de macroenzimas de la fosfatasa alcalina. El método combina una separación previa de las formas isoenzimáticas por gel filtración en capa fina de Sephadex G-200, y el posterior revelado de la correspondiente actividad enzimática in situ. Entre otras ventajas, este sistema no sólo separa adecuadamente las formas macroenzimáticas, sino que mantiene todas las isoenzimas en estado nativo, a diferencia de las técnicas con desnaturalizantes, por lo que es posible su detección y eventual aislamiento. Permite además la resolución simultánea de un gran número de muestras, así como la inclusión de controles de distinto peso molecular (PM) dentro de una misma corrida, lo que facilita en forma significativa la posterior interpretación del perfil obtenido, aportando una gran ventaja con respecto a la técnica de gel filtración en columna. El método propuesto se presenta como una técnica relativamente simple y rápida para el screening de macroenzimas en el laboratorio clínico
Asunto(s)
Humanos , Fosfatasa Alcalina/análisis , Isoenzimas/análisis , Bilis/enzimología , Colestasis/enzimología , Pruebas Enzimáticas Clínicas , Cromatografía en Gel/métodos , Electroforesis en Acetato de Celulosa , Electroforesis en Acetato de Celulosa/instrumentación , Salud Ambiental , Isoenzimas/clasificación , Isoenzimas/aislamiento & purificación , Métodos de Análisis de Laboratorio y de CampoRESUMEN
Se describe un nuevo método para la caracterización de macroenzimas de la fosfatasa alcalina. El método combina una separación previa de las formas isoenzimáticas por gel filtración en capa fina de Sephadex G-200, y el posterior revelado de la correspondiente actividad enzimática in situ. Entre otras ventajas, este sistema no sólo separa adecuadamente las formas macroenzimáticas, sino que mantiene todas las isoenzimas en estado nativo, a diferencia de las técnicas con desnaturalizantes, por lo que es posible su detección y eventual aislamiento. Permite además la resolución simultánea de un gran número de muestras, así como la inclusión de controles de distinto peso molecular (PM) dentro de una misma corrida, lo que facilita en forma significativa la posterior interpretación del perfil obtenido, aportando una gran ventaja con respecto a la técnica de gel filtración en columna. El método propuesto se presenta como una técnica relativamente simple y rápida para el screening de macroenzimas en el laboratorio clínico (AU)