RESUMEN
Se desarrolló un método de Elisa indirecto para el pesquisaje masivo de anticuerpos de ratón contra el virus de la inmunodeficiencia humanos (VIH-1) en sobrenadantes de hibridomas y sueros de animales hiperinmunes. Para la normalización del sistema se evaluaron la concentración de antígeno adsorbida a la fase sólida, la solución tampón diluyente de las muestras, las disoluciones óptimas para cada tipo de muestras y el período de incubación de éstos. Se determinó que una concentración de 5 *g/mL de proteinas virales semipurificadas, una solución tampón de fosfato pH 7,4; 0,1 con tween-20 al 0,05
y albúmina bovina sérica al 1,5
, disoluciones del suero hiperinmune(controles +) y no inmunes (controles -) de 1:2500 y un tiempo de incubación de 18 h a 4-C, ofrecián los mejores resultados. Se obtienen coeficientes de variación interplacas intraplaca por debajo del 5
para los controles positivo/negativo es mayor de 10 en todos los casos
Asunto(s)
Ratones , Ensayo de Inmunoadsorción Enzimática , Anticuerpos Monoclonales , VIH-1RESUMEN
Se desarrolló un método de Elisa indirecto para el pesquisaje masivo de anticuerpos de ratón contra el virus de la inmunodeficiencia humanos (VIH-1) en sobrenadantes de hibridomas y sueros de animales hiperinmunes. Para la normalización del sistema se evaluaron la concentración de antígeno adsorbida a la fase sólida, la solución tampón diluyente de las muestras, las disoluciones óptimas para cada tipo de muestras y el período de incubación de éstos. Se determinó que una concentración de 5 *g/mL de proteinas virales semipurificadas, una solución tampón de fosfato pH 7,4; 0,1 con tween-20 al 0,05% y albúmina bovina sérica al 1,5%, disoluciones del suero hiperinmune(controles +) y no inmunes (controles -) de 1:2500 y un tiempo de incubación de 18 h a 4-C, ofrecián los mejores resultados. Se obtienen coeficientes de variación interplacas intraplaca por debajo del 5% para los controles positivo/negativo es mayor de 10 en todos los casos