RESUMEN

Experiments conducted on triple-negative breast cancer have shown that fucoidan from Lessonia trabeculata (FLt) exhibits cytotoxic and antitumor properties. However, further research is necessary to gain a complete understanding of its bioactivity and level of cytotoxicity. The cytotoxic effect of FLt was determined by the 2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) assay. Apoptosis was analyzed using annexin V and caspase 3/7 staining kit and DNA fragmentation. In addition, transcriptional expression of antiapoptotic (Bcl-2 and XIAP) and proapoptotic (caspase 8, caspase 9, and AIF) genes were analyzed in TNBC 4T1 cells. After 72 h of culture, the IC50 for FLt was 561 µg/mL, while doxorubicin (Dox) had an IC50 of 0.04 µg/mL. In addition, assays for FLt + Dox were performed. Annexin V and caspase 3/7 revealed that FLt induces early and late-stage apoptosis. DNA fragmentation results support necrotic death of 4T1 cells. Similarly, transcripts that prevent cell death were decreased, while transcripts that promote cell death were increased. This study showed that FLt induces apoptosis by both caspase-dependent and caspase-independent mechanisms. These findings suggest that FLt may have potential applications in breast cancer treatment. Further research will provide more information to elucidate the mechanism of action of FLt.

Asunto(s)

RESUMEN

RESUMEN Introducción. El receptor de tipo Toll (TLR) que interactúe con el promastigote de Leishmania spp. determina la vía de activación celular. Objetivo. Identificar la expresión transcripcional de TLR-3, TLR-4, TLR-9, IL-12 y TNF-α en macrófagos infectados con una cepa nativa de L. braziliensis (Lbn). Métodos. La identificación de Lbn se hizo empleando qPCR para secuencias del DNA del cinetoplasto. Los macrófagos peritoneales de ratones fueron infectados con promastigotes y se midieron la producción de óxido nítrico (ON). Se cuantificaron los niveles transcripcionales para TLRs y citoquinas empleando qRT-PCR. Resultados. Lbn presentó 96% de homología con L. braziliensis. En los infectados con promastigotes se observó elevada producción de ON a las 2 h; significativa expresión transcripcional especialmente de TLR-3 y TLR-9 que se correspondió con la expresión para citoquinas. Conclusión. Lbn activó fuertemente a los macrófagos mediante los TLRs endosomales lo cual puede ser aplicado en el diseño de agonistas para tratar la enfermedad.

ABSTRACT Introduction. The Toll-like receptor (TLR) interacting with the promastigote of Leishmania spp. determines the cellular activation pathway. Objective. To determine the transcriptional expression of TLR-3, TLR-4, TLR-9, IL-12 and TNF-α in macrophages infected with a native strain of L. braziliensis (Lbn). Materials and Methods. Identification of Lbn was performed by qPCR for kinetoplast DNA sequences. Mouse peritoneal macrophages were infected with promastigotes (MI) and nitric oxide (NO) production was measured; transcript levels for TLRs and cytokines were quantified by qRT-PCR. Results. Lbn showed 96% homology to L. braziliensis. High ON production was observed in IMs at 2 h; significant transcriptional expression especially of TLR-3 and TLR-9, which corresponded with expression for cytokines. Conclusions. Lbn strongly activated macrophages via endosomal TLRs, which can be applied in the design of agonists to treat the disease.

RESUMEN

Abstract Introduction: The therapeutic benefits of the brown algae fucoidan in the treatment of breast cancer have attracted considerable interest in recent years. However, research using spheroids which provide relevant results in trials for antitumor and immunomodulatory products because they adequately simulate the tumor microenvironment, is limited. Objective: To evaluate the antitumor and immunomodulatory activity of Lessonia trabeculata fucoidan (LtF), native to the Peruvian Sea, on two types of multicellular tumor spheroids. Methods: The study was conducted from January to December 2021. Two types of spheroides were elaborated: from 4T1 tumor cells (MTS), and from 4T1 tumor cells+mouse splenocytes (MTSs). The antitumor activity of LtF was evaluated in MTS by quantifying cell viability with MTT. Immunomodulatory activity was determined in MTSs using the IC50 for two types of treatment: simple, fucoidan alone (LtF) and combined, fucoidan+doxorubicin (LtF+Dox). Pro-inflammatory (TNF-α, IL-6) and anti-inflammatory (IL-10, TGF-β) cytokine production was quantified by sandwich ELISA 72 h after treatment. Dox was used as positive control in all assays. Results: LtF exerted antitumor activity as evidenced by increased necrotic zone and cell debris formation compared to the untreated control. Antitumor activity was concentration dependent between 100 and 6 000 μg/ml. In MTSs, simple treatment increased IL-6 and decreased IL-10 and TGF-β production. The combined treatment significantly reduced TGF-β production. In both treatments and Dox, there was an increase in IL-6 compared to the untreated control. The highest production of IL-10 and TGF-β was observed in the untreated control, compatible with a highly immunosuppressive tumor microenvironment. Conclusions: LtF is a good candidate for the treatment of breast cancer and can immunomodulate the tumor microenvironment alone or in combination with Dox.

Resumen Introduccción: Los beneficios terapéuticos del fucoidan de algas pardas en el tratamiento del cáncer de mama han despertado gran interés en los últimos años. Sin embargo, las investigaciones con esferoides son limitadas, éstos proporcionan resultados relevantes en ensayos de productos antitumorales e inmunomoduladores porque simulan adecuadamente el microambiente tumoral. Objetivo: Evaluar la actividad antitumoral e inmunomoduladora del fucoidan de Lessonia trabeculata (LtF), nativa del Mar Peruano, en dos tipos de esferoides tumorales multicelulares. Métodos: El estudio se realizó de enero a diciembre de 2021. Se elaboraron dos tipos de esferoides: con células tumorales 4T1 (MTS) y con células tumorales 4T1+esplenocitos de ratón (MTSs). La actividad antitumoral de LtF se evaluó en MTS cuantificando la viabilidad celular con MTT. La inmunomodulación se determinó en MTSs utilizando la IC50 para dos tipos de tratamiento: simple, fucoidan solo (LtF) y combinado, fucoidan+doxorubicina (LtF+Dox). La producción de citoquinas proinflamatorias (TNF-α, IL-6) y antiinflamatorias (IL-10, TGF-β) se cuantificó mediante ELISA sándwich 72 h post-tratamiento. En todos los ensayos se utilizó Dox como control positivo. Resultados: En los MTS, el LtF ejerció actividad antitumoral evidenciada por aumento de la zona necrótica y formación de restos celulares respecto al control no tratado. La actividad antitumoral fue concentración-dependiente entre 100 y 6 000 μg/ml. En los MTSs, con el tratamiento simple se incrementó IL-6 y disminuyeron IL-10 y TGF-β. El tratamiento combinado redujo significativamente la producción de TGF-β. Los dos tratamientos y Dox incrementaron IL-6 respecto al control no tratado. La mayor producción de IL-10 y TGF-β se observó en los no tratados, compatible con un microambiente tumoral altamente inmunosupresor. Conclusiones: El LtF es un buen candidato para tratar el cáncer de mama y puede inmunomodular el microambiente tumoral solo o en combinación con Dox.

Asunto(s)

RESUMEN

Introducción. El estrés agudo se relaciona con la enérgica liberación de catecolaminas, citoquinas y cortisol, las cuales afectan la percepción dolorosa. La masticación estimula neuronas serotoninérgicas, dichas neuronas modulan a las vías neurales del dolor; sin embargo, la relación entre dichas variables aún está en proceso de entendimiento. Objetivo. Determinar el efecto del estrés agudo y del estímulo masticatorio sobre el dolor. Métodos. Experimento que se desarrolló en el bioterio de la Facultad de Medicina de la UNMSM. 40 ratones Balb/c machos de 8 semanas de edad. Los ratones fueron asignados aleatoriamente en 5 grupos iguales. A: semana 1 sin ningún estímulo y semana 2 estimulo masticatorio + estrés. B: semana 1 sin ningún estímulo y semana 2 estrés. C: semana 1 estrés y semana 2 sin ningún estímulo. D: semana 1 estímulo masticatorio + estrés y semana 2 sin ningún estímulo. E: control, sin ningún estimulo. El dolor se evaluó en los 5 grupos a los 7 y 14 días mediante la prueba de tiempo de retirada de la cola ante estímulo térmico. Resultados. Se empleó la prueba de ANOVA para la evaluación intergrupo, no hallándose diferencia significativa. Mediante la prueba de t student para muestras relacionadas se hizo la evaluación intragrupo donde se encontró diferencia significativa entre los 7 vs los 14 días tanto en el grupo A (p=0,029) como en el grupo C (p=0,03). Conclusión. El efecto del estrés agudo sobre la percepción dolorosa fue disminuida por el estímulo masticatorio en ratones Balb/c.

Introduction. Acute stress is related to the energetic release of catecholamines, cytokines, and cortisol, which trigger pain perception. Chewing stimulates serotonergic neurons, these neurons modulate the neural pathways of pain; however, the relationship between these variables is still in the process of understanding. Objective. To determine the effect of acute stress and chewing stimulus on pain. Methods. an experiment that was developed in the Faculty of Medicine of the UNMSM. 40 eight-week-old male Balb/c mice were randomly assigned into 5 equal groups. A: week 1 without any stimulus and week 2 chewing stimulus + stress. B: week 1 without any stimulus and week 2 stress. C: week 1 stress and week 2 without any stimulus. D: week 1 masticatory stimulus + stress and week 2 without any stimulus. E: control, without any stimulus. Pain was assessed in the 5 groups at 7 and 14 days using the tail-withdrawal time test before thermal stimulation. Results. The ANOVA test was used for the intergroup evaluation, finding no significant difference. Using the t student test for related samples, the intragroup evaluation was made, where a significant difference was found between 7 vs. 14 days, both in group A (p=0.029) and in group C (p=0.03). Conclusion. The effect of acute stress on pain perception was decreased by chewing stimulus in Balb/c mice.

RESUMEN

Introducción. Los tumores neoplásicos se caracterizan por su invasividad y metástasis. Las células neoplásicas tienen heterogeneidad genética, por lo cual pueden desarrollar resistencia a los quimioterápicos. Por esta razón, las plantas continúan siendo una fuente importante de nuevos productos anticancerígenos. Objetivo. Evaluar la actividad citotóxica y antiproliferativa de un extracto rico en fucoidan de Lessonia trabeculata nativa (EFLt) sobre la línea celular de adenocarcinoma mamario murino, triple negativo 4T1. Métodos. La citotoxicidad y la IC50 se determinaron en monocapas de 4T1 empleando el reactivo MTT. Para demostrar la actividad antiproliferativa se aplicaron los métodos de cierre de herida y anticlonogénico utilizando las IC50 del EFLt y Dox (doxorubicina). El cierre de herida fue evaluado mediante barrido de tiempos discretos; el efecto anticlonogénico fue evaluado 7 días postratamiento mediante el conteo de colonias y se determinó la fracción de sobrevivencia. Adicionalmente, se evaluaron la citotoxicidad y actividad antiproliferativa combinando las IC50 de EFLt y Dox. El porcentaje de migración y conteo de colonias se realizó con el programa ImageJ. Resultados. La IC50 del EFLt (950 μg/mL) produjo 56% de citotoxicidad, 80,3% de inhibición de la migración celular, 68% de inhibición en la formación de colonias. La IC50 de Dox fue 0,5 μg/mL. Conclusiones. El EFLt ejerce citotoxicidad dependiente de la concentración y tiene efecto antiproliferativo sobre 4T1. Se requiere continuar los ensayos en modelos de mayor complejidad que permitan esclarecer el potencial antitumoral del EFLt.

Introduction. Neoplastic tumors are characterized by invasiveness and metastasis. Neoplastic cells are genetically heterogeneous and can develop resistance to chemotherapeutic agents. For this reason, plants continue to be an important source of new anticancer products. Objective. To determine the cytotoxic and antiproliferative activity of a fucoidan-rich extract of native Lessonia trabeculata (EFLt) on the tripe negative murine mammary adenocarcinoma cell line 4T1. Methods. Cytotoxicity and IC50 were determined in 4T1 monolayers using the MTT reagent. To demonstrate antiproliferative activity, "wound" closure and anticlonogenic methods were applied using the IC50 of EFLt and Doc (doxorubicin). "Wound" closure was evaluated by discrete times sweep to determine percentage inhibition of cell migration; the anticlonogenic effect was evaluated by colony counting 7 days after treatment and the survival fraction was determined. In addition, cytotoxicity and antiproliferative activity were evaluated by combining the IC50 of EFLt and Dox. Percent migration and colony counts were performed using ImageJ software. Results. The IC50 (950 μg/mL) of EFLt was 56% cytotoxicity, 80,3% inhibition of cell migration, 68% inhibition of colony formation.The ICof Dox was 0,5 μg/mL. Conclusions. EFLt exerts concentration-dependent cytotoxicity and antiproliferative effect on 4T1. Further studies in more complex models are needed to elucidate the anti-tumor potential of EFLt.

RESUMEN

Introducción. El estrés agudo altera la memoria y aprendizaje espacial y la expresión de la interleuquina 6 (IL-6), mientras que el estímulo masticatorio evitaría dichos efectos. Objetivo. Determinar el efecto del estímulo masticatorio y el estrés agudo sobre la expresión de interleuquina 6, la memoria y el aprendizaje espacial en ratones. Métodos. Experimento con 70 ratones albinos machos de 2 meses de edad de la cepa Balb/c que fueron distribuidos aleatoriamente en grupo A1: estrés agudo 1 hora; grupo A2: estrés agudo 1 hora + estímulo masticatorio 1 hora; grupo B1: estrés agudo 2 horas; grupo B2: estrés agudo 2 horas + estímulo masticatorio 2 horas; grupo C1: estrés agudo 3 horas; grupo C2: estrés agudo 3 horas + estímulo masticatorio 3 horas; y grupo D: sin intervención. Durante 3 días, se evaluó la memoria y el aprendizaje espacial en el laberinto acuático de Morris. La IL-6 fue determinada mediante ELISA. Resultados. La IL-6 fue mayor en el grupo B2 vs los demás grupos (p < 0,001). Además, en el primer día de evaluación, la adquisición de memoria y aprendizaje espacial fue menor en el grupo A1 vs A2 (p = 0,042). Conclusión. Solo en el primer día de evaluación encontramos que el estímulo masticatorio previno la disminución de la adquisición de memoria y aprendizaje espacial en ratones sometidos a estrés agudo de baja intensidad. Los resultados en general no fueron concluyentes sobre el efecto del estímulo masticatorio. Además, la IL-6 fue mayor en el estrés + el estímulo masticatorio (grupo B2) sobre el resto.

Introduction. Acute stress alters memory and spatial learning and the expression of interleukin 6, the chewing stimulus would prevent these effects. Objective. To determine the effect of chewing stimulation and acute stress on the expression of interleukin 6 and memory and spatial learning in mice. Methods. Experiment where 70 male albino mice of the Balb/c of age 2 month were randomly distributed into: Group A1: acute stress 1 hour; Group A2: acute stress 1 hour + chewing stimulus 1 hour; Group B1: acute stress 2 hours; Group B2: acute stress 2 hours + chewing stimulus 2 hours; Group C1: acute stress 3 hours; C2: acute stress 3 hours + chewing stimulus 3 hours; Group D: without intervention. For 3 days, spatial memory and learning were tested in the Morris water maze. Interleukin 6 (IL-6) was analyzed by ELISA test. Results. IL-6 was higher in the B2 group vs the other groups (p<0.0001). In addition, on the first day of evaluation, the acquisition of spatial memory and spatial was lower in the A1 vs. A2 group (p=0.042). Conclusión. Only on the first day of evaluation, we found that the masticatory stimulus prevented the decrease in memory acquisition and spatial learning in mice subjected to low-intensity acute stress. The results were generally inconclusive on the effect of masticatory stimulation. In addition, IL-6 was higher in the stress + masticatory stimulus (group B2) over the rest.

RESUMEN

Introducción: el estrés crónico afecta el equilibrio inmunológico alterando los niveles séricos de interleuquina-6 (IL-6) e interferón gama (INF-γ), dicha alteración afecta al sistema nervioso y al comportamiento humano. La masticación adecuada disminuiría dichos efectos. El objetivo del estudio fue determinar el efecto del estrés crónico y de la masticación sobre los niveles séricos de IL-6 e INF-γ. Métodos: experimento donde se emplearon 64 ratones Balb/c de 8 semanas de edad. Se dividieron en 4 tratamientos: Grupo NE: Masticación normal + estrés, Grupo N: masticación normal sin estrés, Grupo DE: Masticación deficiente + estrés, Grupo D: masticación deficiente sin estrés. Mediante test de ELISA se midió IL-6 e IFN-γ alfinal de la 4ta y de la 8va semana de tratamiento. Resultados: tanto la IL-6 como el IFN-γ fueron mayores en el grupo DE (p<0,05) al final de la 4ta semana. Al evaluarlos al término de la 8va semana se observó que en el grupo NE se incrementó la IL-6 respecto al resto de grupos (p<0,0001), y en el grupo DE fue donde se encontró mayor cantidad de IFN-γ (p<0,0001). Conclusión: el estrés crónico y la masticación deficiente incrementan los niveles séricos de IL-6 e IFN-γ. En cambio, la adecuada masticación disminuye el nivel de tales citoquinas al final de la cuarta semana de tratamiento.

Introduction: chronic stress affects the immune balance by altering the serum levels of interleukin-6 (IL-6) and gamma interferon (INF-γ), this alteration affects the nervous system and human behavior. Appropriate chewing would lessen these effects. The aim of this study was to determine the effect of chewing and chronic stress over serum levels of IL-6 and INF-γ. Methods: experiment in which 64 Balb/C mice of 8 weeks of age were used, they were divided into 4 treatments: Group NE: Normal chewing + stress, Group N: normal chewing without stress, Group DE: Chewing poor + stress, Group D: poor chewing without stress. IL-6 and IFN-γ were measured by ELISA after 4 and 8 weeks of treatment. Results: both IL-6 and IFN-γ were higher in the DE group (p < 0,05) at the end of fourth week of treatment. When evaluating the animals at the end of the eighth week of treatment, it was observed that in the NE group, the IL-6 was increased with respect to the rest (p < 0,0001) and the DE group showed more IFN-γ (p < 0,0001). Conclusion: stress and poor chewing increase serum IL-6 and IFN-γ. In contrast, appropriate chewing decreases the effects of stress on the increase of such cytokines at the end of the fourth week of treatment in animals.

Asunto(s)

RESUMEN

Resumen Introducción: La masticación emerge como un mecanismo fisiológico que modula diversos procesos encefálicos aún en proceso de entendimiento, entre dichos procesos se encuentra el estrés. El objetivo fue determinar la influencia del tipo de masticación sobre el estrés crónico en los niveles leucocitarios. Material y método: Se empleó 48 ratones machos de la cepa Balb/c que se dividieron en 4 grupos iguales: grupo N (masticación normal), grupo NE (Masticación normal + estrés), grupo D (masticación deficiente) y grupo DE (Masticación deficiente + estrés). Los niveles leucocitarios fueron evaluados a la cuarta y a la décima segunda semana de iniciado el experimento. Se sacrificó a cada ratón para obtener su muestra de sangre y evaluar su leucograma. Resultados: Se encontró, a la cuarta semana, linfocitopenia del grupo DE respecto al grupo D y al grupo N (p<0,05), y neutrofilia en el grupo DE respecto al grupo D (p<0,05). A la décima segunda semana se observó linfocitopenia y neutrofilia de los grupos DE y NE al compararlos con los grupos D y N (p<0,05), respectivamente. Conclusión: el estrés crónico produce linfocitopenia y neutrofilia, independiente del tipo de masticación.

Introduction: Chewing emerges as a physiological mechanism that modulates various processes in the brain, even in the process of understanding, among these processes is stress. The objective was to determine the influence of the type of chewing on chronic stress in leukocyte levels. Material and method: 48 male Balb/c mice were used that were divided into 4 equal groups: group N (normal chewing), group NE (normal chewing + stress), group D (poor chewing) and group DE (poor chewing + stress). The leukocyte levels were evaluated at the fourth and the twelfth week of beginning the experiment. Each mouse was sacrificed to obtain the blood sample and evaluate its leukogram. Results: At the fourth week, lymphocytopenia of the DE group regarding group D and group N (p <0.05), and neutrophilia were found in the DE group regarding group D (p <0.05). At the twelfth week, lymphocytopenia and neutrophilia of the DE and NE groups were observed when compared with groups D and N (p <0.05), respectively. Conclusion: Chronic stress produces lymphocytopenia and neutrophilia, regardless of the type of chewing.

Asunto(s)

RESUMEN

Las algas pardas constituyen una fuente de alto contenido de polisacáridos como los fucoidanos que poseen importantes propiedades inmunomoduladoras. El objetivo fue determinar la viabilidad de células mononucleares de sangre periférica humana (CMSPh), producción de óxido nítrico (NO), especies reactivas de oxígeno (ROS) y de las citoquinas proinflamatorias IL-1α, IL-6, TNF-α e IFN-γ en cultivos tratados con fucoidan de Lessonia trabeculata. Se empleó fucoidan de Lessonia trabeculata proveniente de la bahía San Nicolás de Marcona-Ica. Las CMSPh se aislaron empleando Ficoll-Hypaque, se distribuyeron a una concentración de 1x105 células/pocillo en medio RPMI-1640 completo y se trataron con diferentes concentraciones de fucoidan durante 24 y 48 h. La actividad citotóxica se determinó por la reducción de MTT, la producción de NO por la reacción de Griess y las ROS por la reducción del NBT. La producción de citoquinas se cuantificó por ELISA. El fucoidan de L. trabeculata estimuló la proliferación de CMSPh y produjo el incremento de ROS a concentraciones de 100-2000 μg/mL respecto al control (p<0.001), la reacción para nitritos resultó negativa. El fucoidan incrementó la producción de IL-1α y TNF-α a concentraciones de 100 y 10 μg/mL respectivamente, mientras que la producción de IL-6 e IFN-γ no mostró diferencias significativas. Se concluye que el fucoidan de L. trabeculata estimula la proliferación de CMSPh, producción de especies reactivas de oxígeno y las citoquinas proinflamatorias IL-1α y TNF-α que poseen importantes propiedades inmunomoduladoras.

Brown algae are a source of high content of polysaccharides such as fucoidans that have important immunomodulatory properties. The aim was to determine the viability of human peripheral blood mononuclear cells (hPBMC), production of nitric oxide (NO), reactive oxygen species (ROS) and the proinflammatory cytokines IL-1α, IL-6, TNF-α and IFN -γ in cultures treated with fucoidan from Lessonia trabeculata. Fucoidan from Lessonia trabeculata from San Nicolás de Marcona-Ica Bay was used. The hPBMC were isolated using Ficoll-Hypaque, distributed at a concentration of 1x105 cells/well in complete RPMI-1640 medium and treated with different concentrations of fucoidan for 24 and 48 h. The cytotoxic activity was determined by the reduction of MTT, NO production by the Griess reaction and ROS by the reduction of NBT. The production of cytokines was quantified by ELISA. The fucoidan of L. trabeculata stimulated the proliferation of hPBMC and produced the increase of ROS at concentrations of 100-2000 μg/mL with respect to the control (p <0.001), the reaction for nitrites was negative. Fucoidan increased the production of IL-1α and TNF-α at concentrations of 100 and 10 μg/mL respectively, while the production of IL-6 and IFN-γ did not show significant differences. It is concluded that the fucoidan of L. trabeculata stimulates the proliferation of hPBMC, production of reactive oxygen species and the proinflammatory cytokines IL-1α and TNF-α that possess important immunomodulatory properties.

RESUMEN

La fasciolosis es una parasitosis cosmopolita de importancia médico-veterinaria ocasionada por Fasciola hepatica, que afecta al ganado ovino, caprino y vacuno; y accidentalmente al hombre ocasionando una infección endemo-epidémica de difícil diagnóstico. El objetivo fue desarrollar un ELISA sándwich indirecto, empleando 3 anticuerpos, para identificar antígenos de secreción-excreción de Fasciola hepatica (ESFh). Para el ELISA se emplearon anticuerpos policlonales de ratón anti ESFh como anticuerpos de captura, anticuerpos policlonales de conejo anti ESFh como anticuerpos de detección, a las concentraciones de 10 y 5 μg/mL, respectivamente. Como conjugado se emplearon anticuerpos monoclonales de ratón anti-inmunoglobulinas totales de conejo ligado a peroxidasa 1/1000). Se analizaron 31 muestras de heces de ganado ovino y los resultados se compararon con los obtenidos por el examen coproparasitológico directo (CD) y contrainmunoelectroforesis (CIEF). El límite de detección obtenido para ELISA sándwich indirecto fue 100 ng/mL. La prueba presentó una sensibilidad de 100%, especificidad de 96.6% y valores predictivos positivos y negativos de 50% y 96.6% respectivamente; con relación al examen CD. Al comparar ELISA tipo sándwich indirecto con CIEF se obtuvo una especificidad de 93.5% y un valor predictivo negativo del 100%. Se concluye que la prueba de ELISA sándwich indirecto diseñada es capaz de detectar antígenos metabólicos en muestras de heces de ovino y se puede utilizar para el diagnóstico Fasciola hepatica.

Fasciolosis is a cosmopolitan parasitosis medical-veterinary importance caused by Fasciola hepatica, which affects sheep, goats and cattle; and it affects man accidentally causing an epidemic-endemic infection difficult to diagnose. The aim was to develop an indirect sandwich ELISA with 3 antibodies for detecting excretory-secretory antigens of Fasciola hepatica (ESFh). For the development of indirect sandwich ELISA were used, as capture antibody, mouse polyclonal antibodies anti ESFh and polyclonal antibodies rabbit anti-ESFh as detection antibody, at the concentrations of 10 and 5 μg/mL respectively. The conjugate used was mouse monoclonal anti- total immunoglobulins rabbit linked to peroxidase (1/1000). Were analized 31 sheep fecal samples, and the results were compared with those obtained by direct coproparasitological examination (DC) and counterimmunoelectrophoresis (CIEP). The detection limit obtained for indirect sandwich ELISA was 100 ng/mL. The test had a 100% sensitivity, 96.6% specificity, positive and negative predictive values of 50% and 96.6% respectively, in relation to DC test. Comparing with CIEP the specificity obtained for indirect sandwich ELISA was 93.5% and a negative predictive value of 100%. We concluded that indirect sandwich ELISA designed is able to detect metabolic antigens in ovine feces samples and can be used for Fasciola hepatica diagnosis.

RESUMEN

Se evaluaron los antígenos de excreción-secreción (AES) de Fasciola hepatica en muestras de heces de ganado vacuno procedente de áreas endémicas de la Región Andrés Avelino Cáceres (Sierra Central), mediante los métodos inmunológicos de ELISA ("fascidig"), hemaglutinación indirecta (HAI) y aglutinación en látex (AL). Los resultados obtenidos se correlacionaron con el método coproparasitológico de Dennis (CD). Se tomaron 106 muestras de heces de bovino en diferentes distritos, entre octubre y noviembre de 1995 (época lluviosa). El método de AL no detectó los AES; mediante HAI la especificidad fue del 63,6 por ciento y la sensibilidad del 35 por ciento en relación al CD; por ELISA ("Fascidig") se obtuvo uan especificidad del 68,2 por ciento y sensibildiad del 60 por ciento en relación al método CD y con respecto a HAI la especificidad fue 61,7 por ciento y la sensibilidad 50 por ciento. Se determinó una correlación significativa entre el método de ELISA ("Fascidig") y el CD, lo que indica que un diagnóstico por ELISA permite conocer la enfermedad durante la fase prepatente o patente en relación al CD, que diagnostica la enfermedad durante la fase patente. El diagnóstico de la infección o prevalencia por HAI, ELISA y CD fue 35,8 por ciento, 42,5 por ciento y 37,7 por ciento respectivamente. El Indice encontrado corresponde a una zona de alta prevalencia de Fasciola hepatica. El presente estudio permitió evaluar tres métodos inmunológicos y determinar la eficiencia de Elisa-Fascidig como método que posibilitaría el diagnóstico de la fasciolosis durante la fase prepatente y patente de la enfermedad por hallazgo de coproantígenos.

Asunto(s)